子痫前期是妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy, HDCP)的一种类型,是孕妇在妊娠中晚期出现的多器官功能失调性疾病,以妊娠20周后出现高血压、蛋白尿、水肿为特征。关于子痫前期发病机制的学说有很多种,国内外的研究大部分集中在遗传易感性、免疫适应不良、胎盘缺血、氧化应激等学说。其中最著名的学说认为子痫前期的发病机制与免疫耐受异常有关。妊娠早期滋养层细胞可侵入子宫肌层和螺旋动脉,又不被母体的免疫系统所识别和排斥,这与滋养细胞表达的主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex, MHC)相关。人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen, HLA-G)属于人类一种非经典MHC-I类分子,高表达于母胎界面的绒毛外细胞滋养细胞(extravillous cytotrophoblast, EVCT)上。HLA-G主要在母胎的免疫耐受和胎盘血管重铸方面起重要作用。已经有学者证明了HLA-G基因有基因多态性,包括非编码区和编码区的多态性,其中HLA-G非编码区的多态性包括3’端非翻译区(3-untranslated region, 3’-UTR)和5’上游调控区(5-upstream regulatory region,5’-URR)的多态性,近几年来3’-UTR区多态性的研究是一热点。Yie等学者从孕妇方面的研究发现,在HLA-G基因3’-UTR发现一个单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphisms, SNP),即3172位点从正常G突变为A,并认为3172SNP多态性不仅与子痫前期相关,还影响HLA-G mRNA的稳定性。M.H.Larsen S等学者从新生儿方面的研究发现,当新生儿基因型为SNP2995(C)/SNP3127(G) /SNP3172(A)/SNP3181(G)/+14bp纯合子时,与初产妇发生重度子痫前期有较大关联。无论正常妊娠还是子痫前期,都认为是母儿双方基因相互作用的结果；单从母亲或胎儿一方面探讨子痫前期的发病机制是不全面的、是具有局限性的；其发病机制的探讨还应从母、儿双方基因的相互作用,即双方的基因型配伍方面进行分析。目的本课题采用聚合酶链反应技术和直接测序法对2008年10月至2010年11月,在郑州大学第三附属医院产科住院的子痫前期和正常妊娠的孕产妇及其新生儿,进行HLA-G基因3’-UTR SNP的等位基因分型,然后比较HLA-G基因3’-UTR SNP的基因型频率和等位基因频率(1)在两组孕妇中的差异;(2)在两组新生儿中的差异；(3)在两组中母/儿基因配伍中的差异；并探讨HLA-G基因3’-UTR SNP在子痫前期发病机制中的作用,为临床预测子痫前期的发病风险,提供有利的实验证据。材料和方法1研究对象选取2008年10月至2010年11月在郑州大学第三附属医院产科住院的单胎孕产妇。将其分成两组：子痫前期组(病例组)和正常妊娠组(对照组)。子痫前期组中53例孕产妇、32例新生儿,其中包括母儿27对；正常妊娠组中51例正常孕产妇、41例新生儿,其中包括母儿35对。诊断的标准按人民卫生出版社第七版《妇产科学》,并排除慢性高血压病、肾脏疾病、炎症、内分泌疾病、糖尿病、肿瘤等,且所有的患者应随访至产后12周。两组孕产妇都为河南地区汉族居民、无异族通婚史、无血缘关系,并且对孕产妇的年龄、孕周进行比较,发现两组孕产妇的年龄无显著性差异(P>0.05),两组孕产妇的孕周有差异(P<0.05)。2方法采用聚合酶链反应技术和直接测序法对两组孕产妇和新生儿的HLA-G基因3’-UTR SNP的等位基因分型。3统计学处理所有数据均采用SPSS16.0软件进行统计学分析。并判断基因型的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。两组间的计量资料比较用t检验,非正态分布的计量资料用秩和检验。直接计算各组的等位基因频率,对基因型分布的差异采用四格表的卡方检验,n≥40且理论频数(T)≥5,用普通卡方检验；n≥40但1≤T<5时,用校正的卡方检验；n<40或T<I时,用Fisher确切概率法。以α=0.05为检验水准。结果对子痫前期和正常妊娠组的孕产妇及其新生儿的HLA-G基因3’-UTR的各SNP基因型频率分布进行分析,均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),故本研究可以分析HLA-G基因3’-UTR SNP的基因型分布情况。检测到HLA-G3’-UTR有三个单核苷酸多态性,分别为3127位点(rs1063320) C→G、3172位点(rs9380142) G→A、3181位点(rs1610696) C→G。1两组孕产妇中HLA-G基因3’-UTR SNP等位基因、基因型频率的比较1.1两组孕产妇HLA-G基因3’-UTR SNP3127等位基因、基因型频率的比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3127位点存在G、C等位基因,CG、CC、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3127位点G等位基因频率为47.2%,C为52.8%,正常妊娠组G为52.0%、C为48.0%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3127位点CG基因型频率为45.3%,显著低于正常妊娠组CG基因型频率64.7%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。1.2两组孕产妇HLA-G基因3’-UTR SNP3172等位基因、基因型频率比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3172位点存在G、A等位基因,AA、AG、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3172位点G等位基因频率为42.5%,A为57.5%,正常妊娠组G为36.3%、A为63.7%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3172位点AA基因型频率为50.9%,显著高于正常妊娠组AA基因型频率25.5%。两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。1.3两组孕产妇HLA-G基因3’-UTR SNP3181等位基因、基因型频率的比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3181位点存在G、C等位基因,CG、CC、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3181位点G等位基因频率为33.0%,C为67.0%,正常妊娠组G为36.3%、C为63.7%,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。两组孕产妇间HLA-G基因3’-UTR 3181位点各基因型分布频率差异均不具有统计学意义(P>0.05)。2两组新生儿中HLA-G基因3’-UTR SNP等位基因、基因型频率的比较2.1两组新生儿HLA-G基因3’-UTR SNP3127等位基因、基因型频率的比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3127位点存在G、C等位基因,CG、CC、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3127位点G等位基因频率为46.9%,C为53.1%,正常妊娠组G为45.1%、C为54.9%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；两组新生儿间HLA-G基因3’-UTR 3127位点各基因型分布频率差异均不具有统计学意义(P>0.05)。2.2两组新生儿HLA-G基因3’-UTR SNP3172等位基因、基因型频率的比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3172位点存在G、A等位基因,AA、AG、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3172位点G等位基因频率为45.3%,A为54.7%,正常妊娠组G为43.9%、A为56.1%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；两组新生儿间HLA-G基因3’-UTR 3172位点各基因型分布频率差异均不具有统计学意义(P>0.05)。2.3两组新生儿HLA-G基因3’-UTR SNP3181等位基因、基因型频率的比较在本课题研究中,检测到在HLA-G基因3’-UTR 3181位点存在G、C等位基因,CG、CC、GG三种基因型。子痫前期组中HLA-G基因3’-UTR 3181位点G等位基因频率为20.7%,C为57.3%,正常妊娠组G为34.1%、C为65.9%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；两组新生儿间HLA-G基因3’-UTR 3181位点各基因型分布频率差异均不具有统计学意义(P>0.05)。3两组HLA-G基因3’-UTR SNP基因型配伍的比较3.1两组母/儿HLA-G基因3’-UTR SNP3127的基因型配伍比较两组间母/儿HLA-G基因3’-UTR SNP3127的基因型配伍比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2两组母/儿HLA-G基因3’-UTR SNP3172的基因型配伍的比较子痫前期组中母/儿为HLA-G基因3’-UTR 3172位点(AA/AA)的基因型配伍的频率为48.1%,显著高于正常妊娠组(AA/AA)基因型配伍频率31.4%,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.3两组母/儿HLA-G基因3’-UTR SNP3181的基因型配伍的比较子痫前期组中母/儿为HLA-G基因3’-UTR 3181位点(CG/CG)的基因型配伍频率为14.8%,显著高于正常妊娠组(CG/CG)基因型配伍频率40.0%,两组进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)结论1.在中国汉族孕产妇中,HLA-G基因3’-UTR 3127位点SNP可能是子痫前期的保护性因素,3172位点SNP可能与子痫前期的易感性相关。2.HLA-G基因3’-UTR 3181位点母儿为(CG/CG)基因型配伍时,母亲发生子痫前期的风险可能降低；3172位点母儿为(AA/AA)基因型配伍时,母亲发生子痫前期的风险可能提高。