猪蛔虫GST基因的克隆与多态性分析及其在不同发育阶段中的表达

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猪蛔虫(Ascaris suum Goeze 1782)是猪体内最大的肠道寄生虫之一,能感染猪从而造成严重的幼虫移行症和生长障碍,甚至死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。猪蛔虫病(Swine ascariasis)在世界范围内普遍流行,无论是集约化养殖还是农户散养的猪群均易感染猪蛔虫而引起该病的发生,我国猪群的感染率亦在10%~80%。另外,研究发现,猪蛔虫还可以感染鸡、牛、羊及灵长类等动物和人类,是一种易被忽视的人兽共患寄生虫病,不仅会给畜禽养殖造成重大损失,还会对人类健康带来严重的威胁。所以,控制猪蛔虫对畜牧业健康发展和公共卫生安全都具有重要的意义。为了更有针对性地防控猪蛔虫的感染和流行,必须寻找更为有效的疫苗候选基因和药物靶位,而谷胱甘肽S-转移酶(Gultathione S transferases,GSTs)系统作为线虫主要解毒机制,是一个理想的研究目标。多年来,关于GST基因的研究很多,但对猪蛔虫GST基因的研究相对不足。故而,本研究拟对猪蛔虫GST基因编码序列(Coding sequence,CDS)进行克隆并对其结构和抗原表位进行预测,以分析其作为疫苗候选基因的可能性;对西北地区猪蛔虫GST基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行筛选和鉴定并统计各SNP位点等位基因和基因型频率,以分析该基因的遗传多态性;对不同发育阶段猪蛔虫GST基因表达进行检测并分析药物对虫卵和成虫GST基因表达的影响,以分析该基因在猪蛔虫发育过程和药物代谢过程中的作用。获得的结果如下:1.陕西扶风分离到的猪蛔虫GST基因与猪蛔虫和人蛔虫参考基因相似性均为99.5%,但该基因CDS区的第243和248位核苷酸发生了突变,并导致编码的第83位氨基酸发生改变,另外,预测显示,该区域二级结构和抗原表位均十分丰富,且优势抗原表位最可能出现在肽段43~46和201~204区域内或附近。2.西北地区猪蛔虫GST基因存在3个SNP位点,分别为SNP2、SNP3和SNP4,各SNP位点优势等位基因分别为A2、C3和A4,优势基因型分别为A2A2、C3C3和A4G4,共形成8个单倍型,同时,各SNP在各地猪蛔虫群体中均呈中度多态(0.25<PIC<0.50),且采自陕西地区的猪蛔虫GST基因各SNP位点及甘肃地区的猪蛔虫GST基因SNP4位点偏离了哈迪温伯格平衡(P<0.05)。3.猪蛔虫虫卵体外发育以二分裂的方式进行,另外,GST基因在猪蛔虫不同发育阶段表达稳定且没有差异,但药物会引起成虫和虫卵该基因表达水平的变化,其中在成虫中的表达水平显著升高(P<0.001)。综上所述,猪蛔虫GST基因丰富的抗原表位,预示着该基因有作为疫苗候选基因的潜力;该基因SNP位点偏离哈迪温伯格平衡,表明选择压力的存在;药物处理后成虫GST基因表达水平的显著升高,提示该基因在药物代谢中的重要作用并可能与抗药性的产生有关。
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