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通过口服自身抗原诱导免疫耐受能够延迟和抑止自身免疫型疾病和过敏反应，但是口服诱导免疫耐受需要大剂量的抗原或者长期给予小剂量的抗原，而且只有在一个相当窄的范围内有效，免疫致敏个体中免疫耐受难于诱导。霍乱毒素B亚单位分子(cholera toxin B、(CTB)能够克服上述缺点。CTB作为一种载体蛋白分子与糖尿病自身抗原胰岛素B(Insulin B，InsB)链分子交联后口服NOD(non-obese diabetic)小鼠，能够显著减轻胰岛炎症程度和Ⅰ型糖尿病的发生率，而且所需的胰岛素剂量只有单纯使用胰岛素的1／500-1／5000，但是化学交联蛋白成份复杂，难于纯化，而基因工程融合蛋白分子较化学交联蛋白分子有明显的优越性，融合蛋白分子具有操作简便，组分单一等特点。 本实验通过重叠PCR技术分别将胰岛素B链基因和谷氨酸脱羧酶(Glutamate acid decarboxylase，GAD)(531-545)肽段基因分别融合到CTB基因的3′端，获得融合基因CTB-InsB(CI)，CTB-GAD(CG)。将CI、CG基因酶切后克隆到pET22b载体上，转化BL21(DE3)感受态细胞。经FML培养基中的乳糖诱导重组质粒表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE电泳分析后表明该菌株可以表达目的蛋白，CG的分子量为14KD，CI的分子量为17KD，表达产物以包涵体形式表达。CG的表达量占全菌蛋白的30％左右，CI的表达量占全菌蛋白的35％左右。超声破菌后获得包涵体，经2M尿素溶液洗涤后，溶于8M的尿素溶液中，以稀释复性的方式对变性蛋白进行复性。复性蛋白经P．F．F疏水柱纯化，对纯化产物进行脱盐，浓缩处理后蛋白纯度达到90％。Western-blotting表明该融合CI和CG蛋白分子具有霍乱毒素抗原性，能够与CTB抗体特异性的结合。体外实验结果说明CI和CG能够特异性结合神经