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目的:本课题拟在建立急性酒精性肝损伤小鼠模型的基础上,研究竹节参总皂苷对酒精性肝损伤的保护作用,运用分子生物学和免疫学技术,探讨竹节参总皂苷对酒精性肝损伤的保护作用的机制。 方法:将SPF级雄性Balb/c小鼠,6-8Week,20±2g,随机分为正常对照组,模型组,竹节参总皂苷高剂量组,竹节参总皂苷低剂量组。TSPJ高低剂量组分别给予相应剂量的TSPJ,每天两次,连续3天;其余组给予13ml/kg的NS;末次给药后,除正常对照组继续给予NS外,其余组均给予13ml/kg的白酒(56度)灌胃,次/12h,连续3次。其中给予的酒精的量(g)=饮酒量(ml)×酒精含量(％)×0.8。⑴检测各组小鼠肝功能、甘油三酯以及肝脏指数,并做小鼠肝脏组织形态学观察;⑵流式细胞术检测小鼠肝脏枯否氏细胞(kuffer)中TLR4+CD14+的表达情况;ELISA检测小鼠血清中LPS含量变化;⑶检测各组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px活力,MDA含量以及小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px mRNA的表达,检测各组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量变化及小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γmRNA的表达情况。⑷WESTERN BLOT检测肝组织核转录因子NF-kappaB P65的表达。 结果:⑴模型组小鼠肝功能、甘油三酯和肝脏指数均较正常对照组显著上升,且具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹节参总皂苷高、低剂量组小鼠肝功能、甘油三酯和肝脏指数较模型组均小鼠均显著降低,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。与正常对照组相比较,模型组小鼠肝脏脂肪变性指数明显增加,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05),与模型组相比较,竹节参总皂苷高、低剂量组脂肪变性指数均明显下降,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。⑵模型组小鼠血清中LPS含量较正常对照组小鼠明显升高,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05),竹节参总皂苷高低剂量组小鼠血清中LPS含量较模型组小鼠明显降低,与模型组相比,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型组小鼠肝脏kuffer细胞TLR4分子表达较正常对照组小鼠明显升高,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹节参总皂苷高低剂量组小鼠肝脏组织中kuffer细胞TLR4的表达较模型组小鼠明显降低,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。⑶模型组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px活力较正常对照组小鼠显著降低,MDA含量显著上升,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05),竹节参高、低剂量组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px活力较模型组小鼠显著升高, MDA含量显著下降,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05);模型组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px mRNA的表达较正常对照组小鼠均降低,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05),竹节参高、低剂量组小鼠肝脏组织中SOD、GSH-Px mRNA的表达较模型组小鼠均上升,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量较正常对照组小鼠均显著上升,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。竹节参高、低剂量组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量较模型组小鼠均显著降低,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。模型组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γmRNA的表达较正常对照组小鼠均显著上升,具有统计学意义(P﹤0.01或 P﹤0.05)。竹节参高、低剂量组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-4、IFN-γmRNA的表达较模型组小鼠均显著降低,具有统计学意义(P﹤0.01或P﹤0.05)。(4)模型组小鼠肝脏组织中NF-κBp65蛋白表达较正常对照组明显增加,竹节参高、低剂量组小鼠组织中NF-κBp65蛋白表达较模型组明显降低。 结论:⑴竹节参总皂苷可以显著改善急性酒精性肝损伤小鼠的肝功能,降低甘油三酯含量以及肝脏指数,具有较好的护肝作用。⑵竹节参总皂苷可以通过抑制TLR4的表达而抑制肝脏巨噬细胞的激活,从而发挥抗炎作用进而发挥对酒精性肝损伤小鼠的护肝作用⑶竹节参总皂苷可以通过直接清除自由基,以及抑制巨噬细胞的激活而发挥抗氧化作用,从而发挥对酒精性肝损伤小鼠的护肝作用。