活性氧诱导心肌细胞基质金属蛋白酶的激活及其分子机理

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目的:1观察不同浓度的过氧化氢对心肌细胞H9C2中基质金属蛋白酶活性的影响。2探究过氧化氢对心肌细胞H9C2中基质金属蛋白酶的激活的信号通路:JNK/EMMPRIN/MMPs。方法:建立心肌细胞H9C2的细胞培养模型,在CO2的浓度为5%且37℃恒温的孵箱内进行培养。分组:(1)正常对照组(2)过氧化氢不同浓度和时间干预组(3)过氧化氢一定的时间浓度+JNK抑制剂干预组方法:通过Western Blot也称为蛋白质印迹法来测心肌细胞的蛋白量的表达(通过计算所得条带的灰度值比较)。结果:H2O2干预24h,MMP-2对照组(1.0±0.04)vs200组(1.7±0.04),P<0.05,显示MMP-2在用H2O2干预浓度200umol/L时表达增高。H2O2干预24h,MMP-9对照组(1.0±0.04)vs200组(2.14±0.02),P<0.05,显示MMP-9在用H2O2干预浓度200umol/L时表达增高。MMP-2对照组(1.0±0.04)vs JNK抑制剂组(0.7±0.02),P<0.05,显示MMP-2在用JNK抑制剂干预后蛋白表达会降低。P-JNK对照组(1.0±0.04)vs JNK抑制剂组(0.6±0.02),对照组(1.0±0.04)vs H2O2干预组(1.7±0.04)(H2O2干预浓度为200 umol/L,24h),组间比较,P<0.05,显示P-JNK在用JNK抑制剂干预后蛋白表达会降低,且H2O2可以使P-JNK蛋白表达增高。MMP-9对照组(1.0±0.04)vs JNK抑制剂组(0.7±0.02),P<0.05,显示MMP-9在用JNK抑制剂干预后蛋白表达会降低。EMMPRIN对照组(1.0±0.04)vs JNK抑制剂组(0.65±0.02),P<0.05,显示EMMPRIN在用JNK抑制剂干预后蛋白表达会降低。结论:用过氧化氢的终浓度为200umol/L并且干预24h心肌细胞H9C2时,MMP-2和MMP-9蛋白表达的最明显,p-JNK、EMMPRIN的蛋白表达也增加。使用JNK抑制剂干预H9C2心肌细胞后,MMP-2、MMP-9、EMMPRIN、p-JNK的蛋白表达均降低,过氧化氢可能是通过JNK/EMMPRIN来调节MMPs的活性。
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