基于电化学阻抗的蛋白传感器及其在肝纤维化血清标志物检测中的应用研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:SilentWoolf_1981
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电化学生物传感器在目前的生物传感器中占有重要的地位,已在临床诊断、工业、农业分析和环境监测等领域得到了广泛应用。电化学阻抗谱技术能对界面有良好的表征作用,加上实时、高通量以及无损检测等特点,常用来分析传感器电极表面的特性。本研究以电化学阻抗测试系统作为实验平台,采用了具有良好灵敏度和信噪比的微电极阵列,针对蛋白阻抗传感器的动态监测及其在肝纤维化血清标志物检测中的应用进行了研究。首先,以嗅觉仿生系统研究中非常有发展前景的气味结合蛋白(OBPs)为例,构建了蛋白阻抗传感系统,对OBPs及其信息素配体的交互过程进行了阻抗谱动态监测。通过蛋白、配体和电极等不同维度的对照,研究了该系统的灵敏性和选择性。同时,基于分子对接模拟蛋白三维结构,分析了蛋白构象改变与传感器电阻抗之间的关系。最后,面向农作物的病虫害防治,选用了对果蔬具有较强破坏性的桔小实蝇OBPs作为敏感元件,对乙酸异戊酯和苯甲醛两种宿主气味以及非宿主气味香叶醇的感受化学信号机制进行了传感分析,讨论了传感器对于不同气味分子的响应特性及其在病虫害防治等农业领域的潜在应用。基于上述对蛋白阻抗传感器的研究基础,面向传感器的医学应用,结合肝纤维化血清标志物的免疫原理,采用了自组装单层聚乙二醇膜(PEG)将血清标志物透明质酸(HA)和转化生长因子β1 (TGFβ1)的抗体通过共价结合键修饰在电极表面,构建了一种能实现多通道实时检测的阻抗免疫传感器。采用HA和TGFβ1标准品,根据抗原浓度与电子转移电阻相对改变值的关系,测试建立了浓度响应曲线。通过一系列对照实验组的阻抗响应结果验证了传感器良好的特异性和选择性。基于床旁监测(POCT)的发展需求,利用设计的免疫传感器对临床病人血清样本进行了传感测试,通过与临床常规放射免疫分析法(RIA)进行对照,结果表明两种测试结果具有良好的一致性。该研究为肝纤维化的临床诊断提供了一种具有良好应用前景的蛋白阻抗传感器。
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