重金属Cd2+免疫层析胶体金试纸条的研制

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选择1-(4-Isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid(ITCBE)双功能螯合剂作为桥梁将Cd2+与载体蛋白BSA相连接制备完全检测抗原Cd-ITCBE-BSA和对照检测抗原ITCBE-BSA。采用BCA法测定蛋白浓度;紫外分光光度法、SDS-PAGE电泳法和镉离子含量检测法来鉴定抗原是否合成成功。Cd-ITCBE-BSA的蛋白实际浓度为2mg/mL;紫外光谱扫描法结果表明BSA、ITCBE-BSA和Cd-ITCBE-BSA的最大吸收峰依次变小;SDS-PAGE鉴定结果表明在凝胶中完全抗原、对照抗原和载体蛋白的迁移速率大小关系为Cd-ITCBE-BSA﹤ITCBE-BSA﹤BSA。石墨炉原子吸收法测定Cd-ITCBE-BSA中镉含量高达28.55μg/mL,而ITCBE-BSA和缓冲液中几乎不含有镉离子。三种鉴定方法表明完全抗原制备成功。复苏本实验室冻存的抗镉细胞株B8,在37℃培养箱中扩大培养,并接种于石蜡和不完全佐剂处理过的Balb/c小鼠腹腔,7-10天后收集腹水。利用辛酸硫酸铵法初纯腹水,HiTrap Protein G HP亲和层析柱进一步纯化、收集抗体。通过BCA蛋白浓度测定法测定所收集抗体浓度为2mg/mL;间接ELISA测定抗体效价为1:64000;SDS-PAGE方法鉴定抗体纯度,凝胶上纯化后的抗体仅具有重链和轻链两条清晰的条带,无杂带,满足进一步实验的需要。制备平均直径为20nm的胶体金颗粒,标记抗镉单克隆抗体制备金标抗体复合物。采用竞争法建立重金属镉免疫层析胶体金试纸条检测方法,并结合纳米二氧化钛样品富集方法检测镉标准样品和模拟样品。结果表明纳米二氧化钛富集镉的富集倍数为30倍,检测过程耗时50min;结合富集方法,经换算,试纸条定量下限为6.7ng/mL;4℃可保存8周,稳定性良好;仅与汞离子有交叉反应,与其他离子均无交叉反应;ICP-MS检测结果与胶体金试纸条检测结果相关性好,符合国家农业地表水环境检测标准(GB3838-2002)。
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