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目的:
动脉硬化闭塞性疾病(Arteriosclerotic disease,AD)是当今世界上致死致残的首要原因之一,尤其近年来在我国发生率呈逐年上升的趋势。静脉旁路移植是治疗此类引起心脏、肢体等器官缺血疾病的重要方法,而术后发生再狭窄是影响手术近远期效果的最重要原因。血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的无序增殖是再狭窄形成的主要原因之一,而VSMC的增殖依赖于细胞增殖周期的调控。Wnt信号通路不仅在动物胚胎生长发育中有很多生物学意义,而且在细胞的增值、极化迁移和代谢等方面有着重要的作用。国内外已有大量研究证实Wnt家族蛋白Wnt5a与细胞的增殖、迁移等作用密切相关。本文旨在检测Wnt5a在自体移植静脉中表达水平的变化,探讨Wnt5a是否与血管重塑过程中血管内膜及中膜增殖的发生相关。
方法:
建立大鼠颈静脉-腹主动脉移植模型,术后7、14、28天切取移植静脉,取对侧正常静脉作为对照。应用HE染色方法观察正常静脉、静脉移植术后7、14、28天静脉的组织结构并测量各组静脉内膜、中膜厚度;免疫组织化学染色方法及Westem-blot技术检测Wnt5a蛋白在正常静脉、静脉移植术后7、14、28天静脉中的表达水平;Real-time PCR技术检测Wnt5a mRNA在正常静脉、静脉移植术后7、14、28天静脉中的表达水平。
结果:
1、组织学检查结果
HE染色显示:正常静脉内膜覆盖着单层内皮细胞,中膜只有2~3层VSMC;静脉移植术后7、14及28天,细胞增殖,血管壁增厚,新生内膜增厚,分别为正常静脉的(3.24±0.53)、(7.66±0.37)和(12.54±0.72)倍。免疫组化染色发现:正常静脉中Wnt5a阳性细胞极少,移植术后7天新生内膜中Wnt5a阳性细胞增多,14天及28天新生内膜及中膜中出现大量Wnt5a阳性细胞。正常静脉、术后7、14及28天移植静脉Wnt5a阳性细胞百分比分别为(4.67±0.21)%、(20.34±0.26)%、(35.25±0.20)%和(57.24±0.52)%,术后7、14及28天与正常对照静脉相比差异有统计学意义(P<0.01)。
2、Westem-blot检测结果
Western-blot检测结果:正常静脉中有少量Wnt5a蛋白表达,而在术后7、14及28天的移植静脉中Wnt5a蛋白大量表达,分别为正常静脉的2.03、5.71及8.17倍。术后Wnt5a蛋白表达水平随着时间点的延长而逐渐增加,与免疫组织化学结果趋势相一致。
3、Real-time PCR检测结果
Real-time PCR检测结果显示:正常静脉中有少量Wnt5a mRNA的表达,而在术后7、14及28天的移植静脉中Wnt5a mRNA大量表达,分别为正常静脉的3.56、8.44及16.87倍。术后28天的表达量高于术后7天及14天的表达量,与蛋白表达趋势一致。
结论:
1、自体移植静脉重塑过程中Wnt5a在基因及蛋白水平上表达增高,并在静脉移植术后7、14、28天呈逐渐升高趋势。
2、Wnt5a基因及蛋白表达逐渐增多,提示Wnt5a的活化可能与增殖的血管内膜及中膜中的细胞密切相关。