论文部分内容阅读
过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)作为核受体家族成员,广泛存在机体组织和器官之中,与许多生物活性相关。它包括PPARα、PPARδ和PPARγ三个亚型。激活不同的亚型可以发挥不同的药理作用,如降脂药菲诺贝特为PPARα激动剂,降脂药GW501516为PPARδ激动剂,降糖药盐酸罗格列酮为PPARγ激动剂,降糖药莫格他唑为PPARα/γ双重激动剂。基于PPARs不同亚型之间既存在明显的差异性,又密切相关,因此,开发一款对不同亚型均有适度激活作用的PPARs激动剂类药物,不但能减少单重或双重激动剂所带来的毒副反应,且具有药效的协同效应,具有强大的开发价值和市场前景。而目前尚未有PPARs三重激动剂类药物上市,相应的细胞学和体内药效学评价体系也存在不全面、不系统等缺点。本论文旨在构建和完善PPARs三重激动剂类降糖药的受体选择性和体内药效学评价平台,分析海正药业自主研发的创新化合物HS-602激活PPARs不同亚型的半数有效浓度、相对效能百分比,同时在多种动物模型进行体内药效动力学分析。合成 PPARαLBD-Ga14DB、PPARδLBD-Ga14DB、PPARγLBD-Gal4DB 基因并构建表达质粒和报告基因质粒。将PPARα、PPARδ、PPARγ质粒体系分别转染至293E细胞,均与不同浓度梯度的激动剂样品孵育24h。利用化学发光法检测待测样品的荧光素酶反应,计算相对荧光素酶活性,绘制拟合曲线,获得激活PPARs亚型的EC50和Max%。选择阳性对照样品,根据其临床使用剂量推导动物实验所需剂量,设计组别、动物数,选择空腹血糖、口服糖耐量及血浆胰岛素等多个评价指标,完成DIO小鼠和db/db小鼠体内的降血糖活性测试;选择另一种普遍使用的2型糖尿病模型-ZDF大鼠作为研究对象,检测空腹血糖、糖化血红蛋白等2型糖尿病相关指标,以及血脂、肝脏脂肪等脂质代谢相关指标。全面分析和比较化合物HS-602的体内药效。体外受体激活试验结果显示,化合物HS-602对PPARα的激活效能为阳性对照GW7647的15%,对PPARδ的激活效能为阳性对照GW501516的77%,对PPARγ的激活效能为阳性对照Piog的46%。疾病模型小鼠的体内药效显示,HS-602的降血糖活性略优于阳性对照Rosig,明显优于阳性对照Piog,且HS-602-3组的降糖幅度和Piog-30组相当,降低血浆胰岛素的水平亦明显优于同等剂量的Rosig和Piog;ZDF大鼠的药效进一步显示HS-602在改善2型糖尿病症状、调节脂质代谢紊乱等方面效果显著,且优于阳性对照Piog。本文建立了 PPARs不同亚型受体亲和力和激活效能的检测方法,全面评估化合物对不同受体亚型的激活作用;通过化合物HS-602在DIO小鼠、db/db小鼠和ZDF大鼠体内的重复和深入研究,完成2型糖尿病药物的体内药效学评价平台的建设;开创性地建立了 PPARs三重激动剂类降糖药的受体选择性和体内药效学研究平台,处于国内领先水平,为靶点降糖药的前期开发提供全面、可靠的分析和评价手段。