SGAT和GDH两种光呼吸途径酶的敲减对莱茵衣藻生长的影响

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jayden1986
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光呼吸途径是植物体的重要生理途径。本文的研究对象为光呼吸途径中的丝氨酸乙醛酸氨基转移酶(SGAT)和乙醇酸脱氢酶(GDH),SGAT能够催化丝氨酸和乙醛酸生成甘氨酸和羟基丙酮酸;GDH能够催化乙醇酸脱氢生成乙醛酸,这两种酶都是光呼吸途径的关键酶。   在本实验室的前期工作中已经成功获得了三株SGAT敲减株系A,S和T,由于转基因株系能够在不含精氨酸的培养基上生长,因此我们需要获得一种能在不含精氨酸的培养基上生长的对照株系,用来开展对比研究。我们将质粒pARG7.8ψ3转入衣藻中,成功获得了能够在不含精氨酸的培养基上生长的对照株系20个。   对SGAT敲减株系和对照株系的生长速度、叶绿素含量进行了测定,并且用高效液相色谱法测定了SGAT酶活。在正常的光照条件下,A株系的生长速度明显比对照慢;在高光强下,三个株系的生长速度都显著比对照慢,叶绿素含量比对照高,T株系的SGAT酶活有比对照低;在黑暗条件下,A株系的生长速度则比对照快,叶绿素含量显著低于对照,三个敲减株系的SGAT酶活都比对照要低,S株系最低,A株系次之,T株系最高。为了获得更多SGAT敲减水平不同的株系,我们重新进行了玻璃珠转化,获得了19株转化株系,接下来需要对其进行分子鉴定。   在实验室的前期工作中,已经成功获得4个GDH RNAi载体的转化株系,本研究首先对这几个株系进行了PCR检测,成功地检测到了目的片段,证明了RNAi载体已转入衣藻当中。然后在光照条件下测定其生长速度和叶绿素含量,各株系的生长速度都比对照株系慢,只有1株系的叶绿素含量较对照的低。在黑暗条件下,1株系的生长速度和叶绿素含量都比对照株系要低。为了获得更多的GDH敲减株系,用GDH RNAi载体进行玻璃珠转化,成功获得7株转化株系,接下来需对其进行分子鉴定。  
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