论文部分内容阅读
近些年来真菌及其毒素对人畜的危害越来越严重,主要是通过直接污染农副产品而间接威胁人畜的健康与安全,并且真菌类疾病在人畜之间也屡见不鲜。黄曲霉菌属于曲霉属真菌,其主要通过产生分生孢子的方式来进行传播,能污染多种重要的农副产品,对人畜的健康造成了威胁。目前新兴的对于黄曲霉及其毒素的主要防治技术是采用生物防治,因此,本研究选用实验室保存的74种菌株经过初筛和复筛,筛选出一株对黄曲霉菌生长有明显抑制作用的菌株B10,对其培养条件进行优化,对其无菌上清液进行粗提取并且研究其粗提物的抑菌机理,并研究B10粗提物对黄曲霉菌几个产毒关键基因表达量的影响,为采用生物防控技术防控人畜黄曲霉毒素中毒奠定理论和实践基础,主要试验结果如下:(1)通过生化鉴定、常规鉴定和分子生物学鉴定,确定能够抑制黄曲霉生长的拮抗菌为解淀粉芽孢杆菌。(2)对拮抗菌进行条件培养优化,以其培养上清液对黄曲霉菌的抑菌率作为衡量标准,得出拮抗菌培养条件最优条件是:温度40℃,培养时间36h,接种量3%,转速120r/min,pH 6,装液量30ml。(3)对拮抗菌B10的无菌上清液进行粗提取,得到抗菌活性物质粗提物,并对其性质进行研究,通过平板对峙法发现粗提物可以明显抑制黄曲霉菌生长,形成了抑菌带。把抗菌物质粗提物分不同的量加入PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)中与黄曲霉共同培养,发现其菌丝重量明显随着粗提物的增加而下降。将菌丝染色后镜检发现,和正常菌丝体相比,抗菌物质粗提物处理后的菌丝体形态明显发生不规则扭曲、萎缩,说明了抗菌物质粗提物对菌丝的生长有抑制和破坏作用。(4)将抗菌物质粗提物分不同的量加入PDA中与黄曲霉共同培养,用荧光定量PCR检测其黄曲霉产毒基因表达情况发现:与无粗提物A组相比:黄曲霉产毒基因aflR和aflK转录水平随着粗提物量的增加而逐渐地降低(P<0.05),基因aflQ的转录水平随着粗提物的增加发生不同程度的上升(P<0.05)。结论:本试验筛选出的拮抗菌经鉴定为解淀粉芽孢杆菌,其抗菌物质粗提物可以明显的抑制黄曲霉菌丝生长并破坏其形态,并且抑制了黄曲霉产毒关键基因aflR和aflK的表达。