类金刚石薄膜与内皮细胞的相容性研究及其体内植入实验的初步评价

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背景:心脏瓣膜置换术是治疗心脏瓣膜病变的有效办法。机械瓣膜是目前临床上应用最多的一种人工心脏瓣膜,主要是由热解碳或钛合金等生物材料制成,具有很好的耐久性,但是在临床应用中必须终生进行抗凝治疗,而因抗凝不当造成的出血、血栓形成及栓塞又是影响患者长期存活的重要因素。因此,解决机械瓣膜的凝血问题是目前机械瓣膜研究工作中的中心内容。目前采用现代薄膜技术对材料表面进行改性是提高生物材料血液相容性和细胞相容性的一种有效方法。类金刚石(Diamond—like Carbon,DLC)薄膜具有良好的生物相容性,是最有希望改善机械瓣膜血液相容性的涂层材料。目的:探讨用脉冲激光沉积法(PLD)制备的DLC薄膜与内皮细胞的相容性、内皮化的可行性,及其在体内的组织相容性和血液相容性,以期获得具有良好生物相容性的人工机械瓣膜涂层材料。方法:第一部分:类金刚石薄膜与人脐静脉内皮细胞的相容性研究。取24孔培养板,实验组将传代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与DLC薄膜材料体外复合培养,对照组只单独培养HUVEC,分别留取培养第1、3、5、7天的上清液,用硝酸还原酶法测定NO含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定PGI2含量。倒置显微镜观察两组培养孔中内皮细胞的生长形态,并用扫描电镜观察材料表面内皮细胞的形态和粘附情况。第二部分:类金刚石薄膜体内植入实验的初步评价。将DLC薄膜涂层的机械瓣叶(n=6)和未涂层的单纯机械瓣叶(n=6)成对植入6只实验犬右心房内,术后第8周处死,取出材料用SEM观察材料表面血栓形成情况及内皮细胞粘附情况。并对瓣叶材料所接触的心内膜组织行HE染色观察。结果:(1)分别比较两组在培养第1,3,5,7天HUVEC所分泌的NO和PGI2含量,实验组与对照组差异无显著性(P>0.05),两组分泌曲线一致。倒置显微镜观察两组培养孔中细胞生长形态基本一致。SEM观察HUVEC在材料表面形态正常,粘附性能良好,完全覆盖材料表面。(2)材料从犬右心房取出后,SEM观察DLC薄膜涂层的机械瓣叶组材料表面无血栓形成并有内皮样细胞粘附;而单纯机械瓣叶组材料上可见有血栓形成,无内皮细胞粘附。HE染色发现DLC类金刚石薄膜涂层组的瓣叶接触的心内膜的没有增厚,而单纯机械瓣叶引起心内膜的增厚。结论:PLD法制备的DLC薄膜对内皮细胞有良好的细胞相容性,具有内皮化的可行性,同时在体内具有良好的组织相容性和血液相容性,可以安全的用于人工机械瓣膜的构建。
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