目的 通过转基因技术获得两种突变CD59真核表达分子，探讨其糖基化前后抗补体活性的变化，为糖尿病血管增殖症的发生机制提供理论基础。 方法 采用基因定点突变技术在CD59易于糖基化的位点K41--H44将H44基因位置改变，构建两种不同的CD59突变基因，各设计两条互补突变引物和两条常规引物，以已构建CD59cDNA重组质粒为模板，重组PCR定点诱变扩增突变基因，EcoRI酶切重组入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体(Lipofectamine-2000)将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)进行表达。G418筛选稳定转染细胞克隆，荧光免疫组化(FIH)、酶免疫组化(EIH)、流式细胞仪法(FACS)和免疫印迹技术(Western blot)检测筛选CD59突变基因蛋白高表达株。染料释放实验初步检测突变CD59蛋白糖基化前后抗补体活性的变化情况。大量扩增收获高表达细胞备用。 结果 PCR定点诱变成功获得目的CD59突变基因，序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-MAX-突变CD59重组真核表达载体系统，突变基因长度约500bp。Lipofectamine-2000将重组质粒和pcDNA3共转染导入真核受体细胞CHO，G418筛选建立稳定转染细胞克隆。经FIH、EIH、FACS成功检测并鉴定出较高表达突变CD59分子的阳性细胞克隆HM3和HM4。Western blot检测出阳性细胞克隆裂解液中有一条约20KD的CD59蛋白表达带。染料释放实验初步证实突变CD59分子具有抗补体活性，糖基化后抗补体活性明显降低。大量扩增收获阳性细胞克隆以备进一步测定突变CD59功能及制备抗突变CD59 McAb。 结论 以突变CD59基因和pALTER-MAX质粒为基础构建的真核表达体系构建成功，脂质体转染法将重组质粒导入真核细胞并获得膜表面突变CD59分子的表达，表达突变CD59分子具有抗补体活性，但易被糖基化，糖基化后抗补体活性明显降低，为进一步研究糖尿病血管增殖症的发生机制奠定了基础。