目的采用延迟剖宫产术,获得胎窘新生鼠以模拟临床新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE),通过对最佳模型鼠实施电针干预,研究电针刺激对胎窘新生鼠脑中神经源性分化因子(Neuro D)即时表达的影响及长期的作用,探讨其在修复神经系统中的可能作用机制,为电针治疗在HIE疾病的临床应用提供基础实验依据。方法1.采用延迟剖宫产术,建立胎鼠宫内窘迫模型。利用异常行为辨别、冰冻切片HE染色及神经行为学实验(高架十字迷宫、旷场实验、Morris水迷宫)观察不同胎窘时间(10min、20min和30min)新生鼠的变化。2.胎窘新生鼠于第3日龄开始,每天接受持续15min的电针治疗,连续7d,利用神经元标记物Neu N和Neuro D进行免疫荧光染色,观察电针治疗结束后即Day9各组新生鼠脑Neuro D表达的情况。3.利用实时荧光定量PCR检测分析电针治疗后各组新生鼠Day16、Day22、Day35时Neuro D的表达变化;利用蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测电针治疗后各组新生鼠Day16、Day22、Day35时Neuro D的表达情况;利用免疫荧光双标(MAP-2与DAPI,Neu N与DAPI)、三标(Neuro D、MAP-2与DAPI,Neuro D、Neu N与DAPI)进一步观察电针治疗后的各组新生鼠Day22时Neuro D标记的荧光强度。结果1.随着胎鼠宫内窘迫时间的增加,新生鼠的异常神经行为表现越来越明显,胎窘30min时甚至发生抽搐、死亡。各项行为学试验(高架十字迷宫、旷场试验、Morris水迷宫)的结果表明,与空白对照组相比,伴随胎窘时间的延长,新生鼠的自发活动量逐渐减少,焦虑心理逐渐明显,学习与记忆能力发生改变。在胎窘10min与20min的实验鼠当中,其学习能力与空白对照组相比逐渐提高,但记忆能力保持不变,而胎窘30min组与空白对照组相比则表现为记忆能力与学习能力均下降。2.免疫荧光标记Neu N、Neuro D,激光共聚焦结果显示电针干预对各组不同胎窘时间的新生鼠治疗效果差异明显。电针刺激胎窘20min组新生鼠能够最大程度引起Neuro D的过表达,Neu N也表现出了相似的趋势,共同说明了电针治疗后具有分化成熟的新神经元的形成。3.实时荧光定量PCR与Western-blot结果检测,均表明胎窘20min+电针组Day16、Day22及Day35的Neuro D相对表达量始终维持最高,免疫荧光双标与三标Day22的结果也表现为相同趋势。认为,电针治疗能够刺激Neuro D高表达,引发NSCs分化为神经元,从而达到修复受损神经系统的目的。结论胎窘时间为20min的新生鼠接受电针治疗的效果最佳。电针干预通过刺激鼠脑中Neuro D基因转录翻译,进行高表达,以此诱导NSCs分化为神经元,参与受损神经组织修复和功能重建。电针干预的这种促进作用在治疗结束后一段时间仍然存在。