苯酚高效降解菌的筛选及其代谢动力学研究

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苯酚是造纸、炼焦、炼油等行业生产的原材料或中间体,它属于芳香族化合物,毒性强且较难降解。未经处理的含酚废水对人类的生存环境会造成严重威胁。利用微生物降解的方法处理含酚废水是一种经济、高效且无二次污染的方法。从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种,有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术,能够快速提供大量具有特殊作用的微生物,在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。本文以苯酚为唯一碳源,成功从武钢焦化废水曝气池的活性污泥中筛选到50株具有苯酚降解能力的菌株,通过复筛,选取其中一株生长、降解性能最好的菌株WUST-C1为对象,运用形态学、生理生化以及分子生物学方法对其进行鉴定,初步确定该菌株归属于假单胞菌属,其GenBank登录号为JN180124。考察了菌株WUST-C1生长及降解苯酚的基本特性。该菌降解的最适条件为:温度35℃,pH 7.0,转速150 r/min,接种量5 %;在此条件下,36 h内对1200 mg/L苯酚的降解率可达99 %以上;菌株在以苯酚为唯一碳源培养基中可耐受浓度为1600 mg/L。该菌株除了可利用苯酚外,还可利用对苯二酚、萘、邻苯二酚、异喹啉、α-萘酚、吲哚等多种芳香族化合物作为唯一碳源和能源生长;并具有氨苄青霉素、氯霉素等多种抗生素抗性。考察了不同环境因素对菌株生长及苯酚降解的影响。外加碳源对苯酚降解没有促进作用;菌株在不同氮源存在时的降酚能力差别很大,NaNO3和KNO3为氮源的苯酚降解率18h就可达到100 %,而当(NH42SO4、NH4NO3作为氮源时,苯酚在36 h后才降解完全;重金属离子Cu2+,Cd2+,Co2+,Cr6+对菌株有毒害作用,抑制了菌株的生长和对苯酚的降解,Mn2+可促进苯酚的降解;菌株对于苯酚的降解能力随着NaCl浓度的升高而逐渐下降,当NaCl质量浓度达到1.5 %时,菌体几乎失活,苯酚无降解。微生物对苯酚降解途径不同,也会有不同的特征酶。本论文对邻苯二酚-2,3-双加氧酶(C23O)、邻苯二酚-1,2-双加氧酶(C12O)两个关键酶的基因进行PCR扩增,并测定其酶活,确定该菌株的对苯酚的代谢是经邻位途径开环裂解的。以苯酚作为菌体生长的唯一碳源和能源,在初始苯酚浓度为0-1600mg/L的范围内,利用Haldane模型分别研究了细胞生长和底物降解动力学行为,结果表明该模型可以很好地描述细胞生长和对苯酚的降解行为。
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