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高血压是一种普遍存在的心血管疾病,直接影响和损害人身体健康。血管紧张素转化酶(ACE)是肾素—血管紧张素系统中的关键酶,它能促使血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ,引起血压的上升。而可以作为血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)使用的血管紧张素转化酶抑制肽(ACEIP)可以与ACE作用从而达到抑制ACE达到降血压效果,进而达到降低血压的目的。本文应用固定化酶亲和分离方法从皮氏蛾螺中分离纯化ACE抑制肽。从而为开发无副作用的天然来源的ACE抑制肽提供新的可能。本文在前人研究的基础上,应用P123作为模板剂制备介孔分子筛SBA-15,并通过直接吸附Zn2+制备Zn-SBA-15载体,运用亲和吸附技术,将从猪肺中由硫酸铵分级沉淀法粗提得到的ACE固定到该微球上,制备了 Zn-SBA-15固定化ACE。通过对影响制备固定化酶过程中的酶活力的因素进行单因素实验,实验结果得到制备固定化ACE最佳制备工艺为:ACE蛋白质量浓度是55 g/L,固定温度是50 ℃,pH是8.8,反应时间是60 min,在此最佳条件下,Zn-SBA-15固定化ACE活力最高为0.3171 U/g。通过制备的固定化ACE的酶学性质实验研究得到Zn-SBA-15固定化ACE最适pH是8.8,最适温度是42 ℃。本实验所获得的固定化ACE具有较高活性及稳定性,且制备过程简便,为应用固定化ACE亲和分离纯化ACE抑制肽(ACEIP)方面的研究提供基础。本研究同时应用交联CL4B琼脂糖微球作为固定化ACE的载体,以ECH作为活化剂,对微球进行环氧基活化,通过实验得到活化反应的最优条件为:NaOH溶液浓度是0.9 mol/L、NaBH4质量浓度是0.50g/L、环氧氯丙烷体积分数是40%、反应温度是40 ℃、反应时间是2 h,此时活化的琼脂糖微球表面的环氧基密度最高可达113.52 μmol/g。应用共价偶联法将经硫酸铵二级沉淀法粗提得到的ACE固定到活化的琼脂糖微球上制备固定化ACE,通过单因素实验确定制备固定化ACE反应的最优条件为:pH是8.8、反应时间是1.5 h、反应温度是50 ℃、酶液浓度是65 g/L,该条件下固定化ACE的酶活力达到最高可达0.1477 U/g。反应获得固定化ACE的过程简单,且酶活性较好,为后续的ACEIP的分离纯化提供优良载体。通过对以上两种固定化酶的酶活、酶学性质及实验过程简便性和原料的节约性上分析,制备的Zn-SBA-15固定化ACE更适合作为亲和载体从皮氏蛾螺酶解液中分离纯化ACE抑制肽。最后,应用Zn-SBA-15固定化ACE作为亲和载体,依据载体与肽之间的亲和力从皮氏蛾螺酶解物中亲和分离ACE抑制肽。键合在亲和载体上的ACE抑制肽通过提高盐浓度而释放。并通过反相高效液相对经亲和分离后的组分进一步分离纯化。通过Q-TOF测定液相分离得到的组分,鉴定解析出两个ACE抑制肽,分别为十肽:Ile-Val-Thr-Asn-Trp-Asp-Asp-Met-Glu-Lys[m/z 625.790(2+)]和八肽:Val-Gly-Pro-Ala-Gly-Arg-Pro-Gly[(m/z 355.6992(2+)]。同时对合成的两个肽的抑制活性及抑制类型进行了测定,确定二者分别为ACE的非竞争性抑制和混合竞争性抑制。其半抑制浓度(IC50)分别为4.66mM和2.08mM。本研究通过固定化制备出了高活性和稳定性的两种固定化ACE,分别为Zn-SBA-15固定化ACE和CL4B琼脂糖固定化ACE。并成功应用Zn-SBA-15固定化ACE作为亲和载体从皮氏蛾螺中分离纯化ACEIP,分离得到的两个ACE抑制肽均可作为潜在的ACE抑制剂,可以用来降低血压。并且为应用制备的固定化ACE作为亲和载体从其他来源的蛋白质水解产物中分离和纯化ACEIP提供基础和潜在的可能性。