Halobacterium sp.xz515来源细菌视紫质基因的克隆及其表达

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该研究利用新颖的"酶切—连接—PCR"的组合(LPA法),克隆了包括完整AR4基因开放阅读框和0.4kb上游调控区域的总长度1.3kb的DNA片断.该DNA片段克隆到表达载体pNov-R-mini上后转化到细菌视紫质bR缺陷株H.salinarum L33中进行了表达,所得表达产物经分析确认与野生型AR4具有相同的分子量和相同的质子泵功能.对5种具有质子泵功能的细菌视紫质进行的氨基酸同源性分析发现,AR2与AR4在具有最高的同源性,在功能区仅有十个氨基酸残基的差异,但两者却具有相反的质子释放和吸收顺序,提示这10个氨基酸的差异很可能是导致AR4具有相反的质子释放和吸收机制的原因.LPA法被证明是一种从部分已知DNA序列出发快速获得目的基因全序列以及基因两侧序列的简便方法,并已经在多项研究中得到应用.
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