SAHA和氢气对百草枯刺激巨噬细胞活性氧、TNF-α和IL-6产生的影响

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目的  研究组蛋白去乙酰酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SuberoylanilideHydroxamicAcid,SAHA)或氢气(Hydrogen,H2)对百草枯(Paraquat,PQ)刺激巨噬细胞活性氧自由基(Reactiveoxygenspecies,ROS)和促炎细胞因子产生的影响。  方法  用不同浓度PQ刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,根据检测的细胞内ROS水平及细胞培养液中白细胞介素-6(Intedeukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)的水平,选择适当PQ刺激浓度。将RAW264.7细胞分为对照组、PQ刺激组、PQ+SAHA处理组、PQ+H2处理组和PQ+SAHA+H2处理组。分别在1小时、2小时和8小时收取细胞和细胞培养液,检测细胞内ROS(化学荧光法)和细胞培养液IL-6和TNF-α水平(ELISA法)。  结果  1.在实验观察的8小时之内,10-3、10-2和10-1mMPQ刺激的RAW264.7细胞存活率没有明显变化;10mMPQ和1mMPQ刺激的存活率分别在2小时和8小时开始下降。在实验观察的8小时之内,随着PQ浓度从10-3增加到10-1mM,细胞内ROS荧光强度递增;从2小时开始,1mM和10mMPQ细胞内ROS荧光强度下降。在实验观察的8小时之内,随着PQ浓度从10-3增加到1mM,细胞培养液中的IL-6的浓度递增;到PQ浓度增加到10mM时,细胞培养液中的IL-6浓度下降。在实验观察的8小时之内,随着PQ浓度从10-3增加到10mM,细胞培养液中的TNF-α浓度递增。  2.综合考虑上述结果,使用10-1mMPQ刺激RAW264.7细胞,同时给予SAHA或者H2干预。在实验观察的8小时之内,PQ+SAHA组、PQ+H2组和PQ+SAHA+H2组细胞内ROS荧光强度、细胞培养液中IL-6和TNF-α的浓度与对应时间点的PQ组相比均呈下降趋势。  对于细胞内的ROS,8小时的PQ+H2组,2小时和8小时的PQ+SAHA+H2组,细胞内ROS荧光强度均显著低于PQ组(p<0.05);8小时的PQ+SAHA+H2组细胞内ROS荧光强度亦显著低于PQ+SAHA组(p<0.05)。  对于细胞培养液中的IL-6,8小时的全部3个干预组细胞培养液中IL-6的浓度均显著低于PQ组(p<0.05);8小时的PQ+SAHA组、PQ+SAHA+H2组IL-6浓度均显著低于PQ+H2组(p<0.05)。  对于细胞培养液中的TNF-α,1、2、8小时3个时间点的3个干预组细胞培养液中TNF-α的浓度均显著低于对应时间点PQ组(p<0.05);1、2小时的PQ+SAHA+H2组TNF-α浓度均显著低于PQ+SAHA组(p<0.05);8小时的PQ+SAHA+H2组TNF-α浓度均显著低于PQ+H2组(p<0.05)。  结论  PQ对巨噬细胞具有炎性激活作用,高浓度的PQ对巨噬细胞产生毒性作用。SAHA及H2均能够抑制PQ刺激的巨噬细胞的炎性反应。SAHA联合H2对抑制PQ刺激的巨噬细胞炎性反应具有协同效应。
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