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胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎的病原菌。高温热激需求蛋白(High-temperature requirement A，HtrA)作为丝氨酸蛋白酶之一，也能作为细菌的分泌蛋白降解宿主的E-钙粘蛋白。本研究旨在探究胸膜肺炎放线杆菌HtrA蛋白介导细胞毒性作用及其对APP环境生存能力的影响。
首先，证实APP HtrA蛋白能够介导细胞毒性作用。本研究使用rHtrA鼠免血清为探针对提取的5b APP分泌蛋白进行western-blot实验，证明了HtrA蛋白为胸膜肺炎放线杆菌的分泌蛋白。使用不同浓度的重组纯化蛋白rHtrA处理猪肺泡巨噬细胞(Porcine aveolar macrophages，PAM)24h和36h后，采用MTT法检测细胞活力，发现在两个时刻细胞活性与作用蛋白浓度呈负相关，且作用时间越长活性越低。其次，发现APP HtrA蛋白通过促细胞凋亡方式介导细胞毒性作用。研究通过DAPI染色液进行核染证明了rHtrA蛋白能够引起细胞的凋亡。Anne V-FITC/PI双染法检测到PAM细胞凋亡率与相互作用的rHtrA蛋白浓度呈正相关。以上实验说明HtrA蛋白能通过促细胞凋亡的方式使PAM细胞增殖受到抑制。最后，探明HtrA蛋白能够增强APP环境生存能力。本研究构建了HtrA蛋白过表达菌株，通过压力耐受实验，发现HtrA蛋白的过表达能显著增强5b APP在部分压力环境（高温、酸性和高渗）下的生存能力(p＜0.5)，但是对5b APP在溶血活性以及生物被膜的形成没有显著影响(p＞0.5)。HtrA蛋白的过表达增强了APP在恶劣环境中的生存能力。
首先，证实APP HtrA蛋白能够介导细胞毒性作用。本研究使用rHtrA鼠免血清为探针对提取的5b APP分泌蛋白进行western-blot实验，证明了HtrA蛋白为胸膜肺炎放线杆菌的分泌蛋白。使用不同浓度的重组纯化蛋白rHtrA处理猪肺泡巨噬细胞(Porcine aveolar macrophages，PAM)24h和36h后，采用MTT法检测细胞活力，发现在两个时刻细胞活性与作用蛋白浓度呈负相关，且作用时间越长活性越低。其次，发现APP HtrA蛋白通过促细胞凋亡方式介导细胞毒性作用。研究通过DAPI染色液进行核染证明了rHtrA蛋白能够引起细胞的凋亡。Anne V-FITC/PI双染法检测到PAM细胞凋亡率与相互作用的rHtrA蛋白浓度呈正相关。以上实验说明HtrA蛋白能通过促细胞凋亡的方式使PAM细胞增殖受到抑制。最后，探明HtrA蛋白能够增强APP环境生存能力。本研究构建了HtrA蛋白过表达菌株，通过压力耐受实验，发现HtrA蛋白的过表达能显著增强5b APP在部分压力环境（高温、酸性和高渗）下的生存能力(p＜0.5)，但是对5b APP在溶血活性以及生物被膜的形成没有显著影响(p＞0.5)。HtrA蛋白的过表达增强了APP在恶劣环境中的生存能力。