PRR11是一个富含脯氨酸的蛋白，共编码360个氨基酸，基因位于染色体17q22，此区域是在肺癌等各种肿瘤上的一个高发的基因扩增区，通过前期的研究表明，此基因可能是一种新的肿瘤相关基因，对新的肿瘤相关基因的研究不仅有助于进一步阐明肿瘤发生、发展的机制，而且也可能作为有效的生物靶点用于寻找新的肿瘤诊断方法以及开发新的抗肿瘤药物。本课题通过构建PRR11真核、原核表达载体，通过过表达观察对细胞周期的影响，并观察蛋白细胞定位，对深入研究PRR11功能奠定基础。 第一部分PRR11基因原核表达载体的构建、表达及鉴定 目的：构建人PRR11基因的原核表达载体，表达及鉴定。 方法：以Hela细胞cDNA为模板，PCR扩增PRR11基因，克隆入原核表达载体PET-28a中，测序正确后，再把构建好的重组原核表达载体PET-28a-PRR11转化到BL21中，经IPTG诱导蛋白表达，提取细胞蛋白并用Western blot分析目的蛋白的表达情况。 结果：成功扩增了PRR11基因，双酶切鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中，测序结果序列完全正确，表达载体构建成功。转化到BL21细胞中经IPTG诱导目的蛋白成功表达，Western blot分析也证实了目的蛋白表达成功。 结论：成功构建了PRR11基因的原核表达载体，为深入研究PRR11基因功能奠定基础。 第二部分PRR11基因真核表达载体的构建、表达及鉴定。 目的：构建人PRR11基因真核表达载体，检测其表达情况。 方法：以PET-28a-PRR11为模板，通过PCR扩增PRR11并将之克隆至pcDNA3.1真核表达载体，测序鉴定正确，PCR、Western blot鉴定。 结果：双酶切鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中，测序结果序列完全正确，表达载体构建成功，Western Blot检测表明有目的蛋白表达。结论：成功构建人PRR11基因的真核表达载体，并表达成功。第三部分PRR11细胞定位及初步功能研究目的：构建含GFP-PRR11的真核表达载体，观察基因在细胞内的表达定位以及对细胞周期的影响。方法：以PET-28a-PRR11为模板，通过PCR扩增PRR11并将之克隆至PEGFP-C1真核表达载体，测序鉴定正确，PCR、Westernblot鉴定。 结果：双酶切鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体PEGFP-C1中，测序结果序列完全正确，表达载体构建成功，Western Blot检测表明有目的蛋白表达。 结论：成功构建人PRR11基因的GFP-PRR11重组蛋白的真核表达载体，观测到蛋白细胞内表达定位。