论文部分内容阅读
背景与目的:妇科生殖道肿瘤中,卵巢癌的发生率低于宫颈癌和宫体癌,位居第三位,但死亡率却是最高的。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为肿瘤新生血管形成中最重要的血管生成因子,对多种肿瘤侵袭性生长、转移起关键作用。研究结果已证实VEGF与卵巢癌的增殖、浸润和转移密切相关,且VEGF能够通过自分泌或旁分泌的方式作用于肿瘤细胞自身,从而增强肿瘤细胞的侵袭力,但其作用机制尚不清楚。为探讨VEGF及其相关蛋白与卵巢癌侵袭力的关系,本研究分析VEGF体外对卵巢癌细胞系HO-8910蛋白质表达谱的影响,为寻找VEGF促进卵巢癌早期侵袭、转移相关蛋白提供新的方法和线索。方法:(1)以卵巢癌HO-8910细胞系为研究对象,常规方法培养至70%-80%融合,3%低血清培基饥饿24小时,用VEGF诱导HO-8910细胞24小时,同时设无VEGF诱导的HO-8910细胞为空白对照。(2)提取两组细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离蛋白质,PD Quest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laster desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白。(3)Real timePCR检测部分差异蛋白质:磷酸丙糖异构酶(Tim)、亲环素A(PPIaseA)、核纤层蛋白(Lamin-A/C)及埃兹蛋白(Ezrin)的mRNA在两组细胞中表达差异。(4)Western Blot及免疫细胞化学技术检测差异蛋白质Ezrin在两组细胞中的表达水平及差异。(5)透射电子显微镜观察VEGF诱导前后HO-8910细胞超微结构改变。结果:(1)建立了VEGF诱导前后人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910的2-DE图谱,图像分析识别了30个差异表达蛋白质,质谱鉴定了17个非冗余蛋白质。(2)Real time PCR显示了4个差异蛋白质(Tim、PPIase A、Lamin-A/C、Ezrin)的mRNA在两组细胞中的表达差异:VEGF诱导后,Tim在HO-8910细胞中表达上调,PPIase A、Lamin-A/C及Ezrin则表达下调,与蛋白质组学分析结果一致。(3)Western Blot及细胞免疫化学结果也表明了VEGF诱导后Ezrin蛋白在HO-8910细胞中表达下调。(4)透射电子显微镜观察表明VEGF诱导后HO-8910细胞异型性增加。结论:(1)首次建立了VEGF诱导前后HO-8910细胞系的双向凝胶电泳图谱,图像分析识别了30个差异表达的蛋白质点,质谱鉴定了其中17个非冗余蛋白质,这些差异蛋白主要涉及肿瘤细胞的侵袭、转移和增殖。(3)Real time PCR、Western Blot及免疫细胞化学进一步证实了VEGF诱导后HO-8910细胞中Ezrin、PPIase A及Lamin-A/C蛋白表达下调:Tim蛋白则表达上调,这些蛋白主要与癌细胞的侵袭力相关。(3)VEGF诱导后,HO-8910细胞的异型性进一步增加。(4)VEGF有可能通过调控Ezrin、PPIase A、Lamin-A/C、Tim等相关蛋白的表达来影响卵巢癌细胞的侵袭、转移和增殖,这具有重要的理论意义和临床应用价值。