目的：恶性肿瘤的发生发展是一个复杂的、多步骤的过程，涉及多种基因的调控。p73基因是最近新发现的定位于人染色体1p36.3上的基因，由于在神经母胞瘤及其他多种肿瘤中该区域频繁出现缺失，而且p73结构与功能和p53相似，故认为它是p53家族成员。p53基因是公认的人类癌症中最易发生突变的肿瘤抑癌基因，所以有人认为p73也是一个抑癌基因。但是近来许多学者在多数肿瘤中发现p73高表达、很少有突变、并呈双等位基因表达，故有人提出p73并不是一个抑癌基因。喉癌的发病原因目前尚不明确，有关p73与喉癌关系的研究未见报道。本研究应用RT—PCR及流式细胞术(FCM)，分别从mRNA及蛋白水平分析了p73基因在喉癌组织的表达情况，试从分子生物学角度去探讨喉癌发生机制。 方法：组织标本采集自河北医科大学第四医院耳鼻喉—头颈外科2000年12月—2001年12月住院喉鳞癌手术患者42例，分别采用肿瘤组织和远癌正常组织(手术切缘，距肿瘤＞2cm)作为对照。其中男性38例，女性4例；年龄42—74岁，中位年龄57岁；吸烟史＞30年17例，＜30年25例；癌肿＞3cm25例，＜3cm17例；有淋巴结转移的7例，没有淋巴结转移的35例；声门上型喉癌24例，声门型16例，声门下型2例；临床Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期25例；病理学分级Ⅰ级2例，Ⅱ级35例，Ⅲ级5例。 中文摘要所有42例标本均做RT个CR检测，取其中38例癌组织、12例远癌正常组织待 FCM检测。 RT＋CR方法： 运用TriZOI法提取RNA，鉴定RNA的完整性和纯度，之后进行逆转录PCR。 p73引物序列（上游5’一AAC GCT GCC CCA ACCACG A卜3’，下游 5’－sCC GGT TCA TGC CCC CTA CA——3’）， 反应条件：95℃1分钟，60℃l分钟，72℃l分30秒，33个循环，PCR产物23fop。p—actin为内参照。 结果判定：ski PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳后，通过凝胶成像仪进行DNA电泳条带和光量子强度分析，将 p73与 D －nctin＊值作为 p73表达水平的参数，对 p73产物相对定量。 FCM方法： 第一抗体为兔抗人p73多克隆抗体，第二抗体为羊抗兔FITC—IgG抗体。采用美国BD公司生产的FACS刊20型流式细胞仪进行检测。 结果判定：p73基因蛋白以荧光指数（FI）作为定量表达指标J瘤细胞 FI值大于远癌正常组织细胞的、＋Zs为阳性表达吓九刀6人 反之为阴性表达。 统计学处理 所有结果均经access数据库整理，应用美国SAS公司的 SAS统计软件 6．12 TS020 for windows，进行配对 t检验，成组t检验，单因素方差分析，x‘检验，Fisher精确检验。以双侧p＜0刀5为差异在统计学上有显著性意义，p宅0刀1 2 中文摘要 为差异在统计学上有非常显著性意义。 结果： lp73 InRNA在喉癌和远癌正常组织中的表达：42例 喉癌组织中有32例＊6．2％）p73表达阳性。相应的远 癌正常组织中有 9例Q．4％）扩增出小3表达阳性。 癌组织的阳性表达率明显高于远癌正常组织，两者之 间有非常显著性的差异中－0．00人癌组织 P73雌一 actin上值为0．67上0．25，s癌正常组织p73／p一actin 比值为 0厂 5士 0刀6，癌组织明显高于远癌正常组织， 两者之间有非常显著性的差异中二0刀00人 2 p73 InRNA与喉癌临床病理特征的关系：I、11期喉 癌患者p73InRNA表达水平为0．42士0．19，Ill、IV期 喉癌患者p73mLRNA表达水平为0．94士0．31，Ill、IV 期喉癌患者p73InRNA表达水平明显高于I、11期喉 癌患者，两者之间有非常显著性的差异中一0刀01人 病理组织学I、11、Ill级喉癌患者p73lfll－－－xnA表达水 平分别为 0．76土0．22、0．60士0．17、2．26士0．83，HI级 喉癌患者p73觎NA表达水平明显高于I、11级喉癌 患者，I级与＊级、11级与＊级之间有非常显著性的 差异；喉癌p73基因InRNA的表达与性别、年龄、吸 烟史、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分型无关。 3 p73蛋臼在喉癌和远癌正常组织中的表达：38例癌 组织中 33例蛋白表达阳性，阳性率为 86．8％。而在 12 例远癌正常组织中有2例蛋白表达阳性，阳性率为 16．6％，癌组织阳性表达率明显高于远癌正常组织，两 者之间有非常显著性的差异（p＝0刀of人定量分析喉 3 中文摘要 癌及远癌正常组织的n值，癌组织为 l．18土 0．15， 而远癌正常组织为0．96士0刀5，癌组织FI值明显高于 远癌正常组织，两者?