叶绿素铜钠调节免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠骨髓间充质干细胞的研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bujifangzong
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目的:通过观察叶绿素铜钠(SCC)诱导免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)向成骨细胞分化;对T淋巴细胞的免疫调节;以及对MSC分泌TGF-β1的作用,探讨SCC对再障小鼠MSC的调节作用及其机理。  方法:①制备免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型,随机分为6组:正常对照、再障模型、SCC低剂量、SCC中剂量、SCC高剂量、环孢菌素阳性对照组。治疗15d,观察各组外周血常规、骨髓病理切片。  ②取治疗后各组小鼠的骨髓培养 MSC,培养到3代后,诱导MSC向成骨细胞分化,观察原代及第1、2代MSC及成骨细胞的形态,并计数成骨细胞的钙结节变化。  ③流式细胞术鉴定各组MSC,并检测PHA刺激的MSC对T淋巴细胞 CD4+CD25+FOXP3+T细胞的调节。  ④酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组MSC分泌的TGF-β1的浓度。  结果:①SCC中剂量组小鼠的外周血白细胞数明显高于再障模型组(P<0.05);SCC低、中和高三个剂量组及环孢菌素阳性对照组小鼠的外周血红蛋白均明显高于再障模型组(P均<0.01);以上四个治疗组的外周血小板数也明显高于再障模型组(P<0.001)。同时,四个治疗组的骨髓增生状况均较再障模型组活跃,其中SCC中、高剂量组的骨髓增生均较环孢菌素阳性对照组活跃。  ②第2代MSC细胞比原代与第1代MSC胞体突起更长而饱满。第3代MSC诱导后,各组均可以见到成骨细胞,再障模型组钙结节计数明显少于其余5组,SCC低、中及高剂量组的钙结节计数均显著性高于模型对照组(P均<0.001),其中以SCC中剂量组的钙结节计数最多。  ③再障小鼠的MSC表达CD29、CD44,但不表达CD34。与再障模型组比较,其余5组CD25+FOXP3+/CD4+增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。  ④SCC低剂量、高剂量组MSC分泌TGF-β1水平均高于再障模型组(P分别<0.05,0.01);SCC中剂量、环孢菌素阳性对照组MSC分泌TGF-β1水平均高于再障模型组(P<0.001)。  结论:叶绿素铜钠对免疫介导再生障碍性贫血模型小鼠的疗效确切,能够改善骨髓造血功能,提升外周血细胞;具有诱导 MSC向成骨细胞分化的功效,提高 MSC对 T淋巴细胞的免疫调节,及促进MSC分泌TGF-β1的作用,为叶绿素铜钠临床用于治疗再生障碍性贫血提供了实验依据。
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