论文部分内容阅读
应用巢式RT-PCR方法检测人卵母细胞及各发育阶段的人类植入前胚胎中IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ的表达，探讨其在植入前胚胎发育中的生物学意义。通过荧光定量RT-PCR的技术，建立单个植入前胚胎的mRNA定量的检测方法，并同时探讨IGF-Ⅱ的表达与人植入前胚胎质量的关系。第一部分胰岛素样生长因子在人植入前胚胎细胞中的表达材料：收集行常规IVF和ICSI患者不受精的成熟卵母细胞25个。收集行常规IVF和ICSI患者及PGD后不适合移植及冷冻保存的胚胎129个，其中3原核(3PN)胚胎52个，双原核(2PN)胚胎65个，由废胚继续培养得到桑椹胚10个、囊胚12个。方法：单个细胞裂解液制备卵母细胞及胚胎总RNA；逆转录合成cDNA；巢式PCR选择扩增IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ基因，内参照选择基因β-actin。扩增产物行琼脂糖凝胶电泳。
第二部分胰岛素样生长因子-Ⅱ基因表达与人植入前胚胎的质量的研究材料：收集行常规IVF和ICSI患者及PGD后不适合移植及冷冻保存的胚胎172个。其中3PN胚胎44个，2PN胚胎128个。每一个胚胎均进行常规的胚胎评分(包括原核期评分和第三天的细胞数及分级)。
结论1.人类未受精的卵母细胞及植入前各阶段胚胎均未检测到IGF-Ⅰ表达，而所有的卵母细胞及各阶段胚胎均有IGF-Ⅱ的表达。2.荧光定量RT-PCR技术可用于检测单个植入前胚胎的mRNA含量，从而可作为一个更为精确的进行胚胎早期发育调控研究的实验工具。3.IGF-Ⅱ可作为胚胎质量的标记物；IGF-Ⅱ基因表达量和胚胎的形态学评分呈正相关。4.年龄较轻和妊娠的病人中其胚胎中IGF-Ⅱ的基因表达量较高。