乳源性免疫调节肽的体外生物活性及其稳定性研究

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免疫调节肽是一类来自于蛋白质的功能性化合物,它具有促进和调节免疫功能的作用。随着科学技术的发展以及研究的日趋深入,越来越多的免疫调节肽被发现,并逐步应用到医药、食品等行业,成为食品以及医药领域非常热门的研究课题。本实验主要分为对于免疫调节肽的免疫功能研究、其他生理活性的研究和免疫调节肽的稳定性研究三大部分。为研究免疫调节肽的免疫功能,本课题从发挥免疫作用的两大免疫细胞——淋巴细胞和巨噬细胞出发,分别研究免疫调节肽对于体外淋巴细胞增殖、细胞周期、细胞因子IFN-γ和IL-4分泌的影响,研究对于体外巨噬细胞增殖、中性红吞噬能力、一氧化氮诱生量、细胞因子TFN-α分泌的影响。结果表明,乳源性免疫调节肽QEPVL在较低浓度下能够有效促进体外淋巴细胞的增殖(SI=1.186),促进IFN-γ和IL-4分泌,并且具有一定的量效关系。在体外巨噬细胞的免疫方面,QEPVL虽表现出一定的作用,但效果不明显。因此推断,QEPVL主要通过调节淋巴细胞的增殖以及IFN-γ和IL-4分泌达到免疫调节的作用。为研究免疫调节肽和其他生理活性之间的关系,本课题进一步探讨了QEPVL的抗高血压功能。通过RP-HPLC测定QEPVL的抗高血压功能及其机制发现,QEPVL具有体外抗高血压功能,IC50=701.3μM,其发挥抗高血压的机制为竞争性抑制,Ki=6.05mM。根据ACE的升、降压机制推测,QEPVL可能竞争性抑制ACE,从而阻止舒缓激肽的降解,间接发挥免疫调节作用,其竞争性抑制可能是其既具有抗高血压功能又具有免疫调节功能的关键。为研究外界环境及人体内环境对QEPVL生理活性的影响,本课题探讨pH、温度、时间以及模拟胃肠道消化对于QEPVL生理功能的影响。实验结果显示,QEPVL对于不同的pH(pH1-12)、温度(4℃和37℃)和时间(1、2、3小时)呈现稳定的性状。在胃蛋白酶、胰蛋白酶的消化下,QEPVL被消化降解,用UPLC-Q-TOF-MS鉴定序列得QEPV,但其生理活性并没有受到显著性影响。本课题深入探讨了乳源性免疫调节肽QEPVL的免疫调节机制及其稳定性,为其工业化生产以及体内实验提供了有价值的参考。
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