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猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)的GP5蛋白是PRRSV最重要的结构蛋白之一,可诱导机体产生中和抗体并具有很强的中和病毒活性,而且还可刺激机体产生细胞免疫,是研制新型疫苗的首选靶蛋白。猪瘟病毒(classical swine rever virus,CSFV)E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要结构蛋白之一,能诱导机体产生中和抗体和保护性免疫应答,因此,E2蛋白是开发猪瘟新型疫苗、诊断试剂及研究CSFV致病机理的重要靶蛋白。“自杀性”DNA疫苗(suicidal DNA vaccine)是基于常规DNA疫苗和“自主复制型”RNA疫苗(self-replicating RNA vaccine)基础上发展起来的一种新型疫苗,不仅具有“自主复制型”RNA疫苗的安全性与高效性,而且结合了常规DNA疫苗制备简单、保存方便等优点,这使其成为目前核酸疫苗研究的热点。为了获得新型双价“自杀性”DNA疫苗,将PRRSV GP5基因克隆于此前构建的表达CSFV E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELlSA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能发生特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。这表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。