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目的:通过博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,观察MG132对肺纤维化的治疗作用,同时研究MG132的抗纤维化作用机制及其对TGF-β1/Smad信号通路的调控机制。方法:1、肺纤维化模型的建立及实验分组:选取120只SD大鼠,随机分为肺纤维化模型组(90只)和生理盐水对照组(NS组,30只)。模型组给予气管内注射博来霉素(0.3ml,5mg/kg),对照组气管内注射0.3ml生理盐水。造模后第一天将模型组随机分为3组:博来霉素组(BLM组),二甲基亚砜组(DMSO组),MG132组,每组30只。MG132组每日予以腹腔注射MG132(0.3ml,0.1mg/kg.d),DMSO组每日腹腔注射0.3ml二甲基亚砜溶液,BLM组和NS组分别每日腹腔注射生理盐水0.3ml。2、观察并记录大鼠在各时间点的一般情况。各组大鼠分别在第7、14、28天随机处死10只,取出肺组织,观察肺组织大体结构变化及炎症反应。3、肺组织病理学检测:取出的肺组织行石蜡包埋、切片、Masson染色、HE染色,Ashcroft评分评估纤维化程度。4、分子机制研究:Western blot及免疫组化检测CD31、α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smurf2、SnoN的表达。qRT-PCR检测Smurf2、SnoN的mRNA表达情况。结果:1、大鼠的一般情况:NS组第7、14、28天,大鼠一般状态良好,皮毛顺滑,呼吸平稳、活动灵敏,摄食正常,体重逐渐增加。BLM组,大鼠状态逐渐变差,精神萎靡,活动迟钝,呼吸加快,摄食减少,体重下降。DMSO组与BLM组大鼠表现相似。MG132组,大鼠的一般状态、活动、摄食、呼吸、体重均介于NS组与BLM组之间。(第6天,BLM组和MG132组大鼠各死亡1只,检查大鼠发现颈部皮肤红肿,有黄白色脓性液体渗出,考虑为肺纤维化造模时,颈部切开后伤口消毒不严格引起感染导致死亡。第18天DMSO组大鼠死亡1只,解剖大鼠发现腹腔粘连严重,考虑腹膜炎引发大鼠死亡。)2、肺组织情况:NS组在各时间点,外表呈粉红色,光滑、饱满有弹性。BLM组,早期有散在出血点,弹性可,晚期肺组织质地坚硬,色泽暗红,体积缩小。DMSO组,肺组织大体表现与BLM组相似。MG132组,早期为粉红色,有少量出血点,晚期色泽变暗,体积缩小,弹性下降,但程度较BLM组轻。3、病理学情况:(1)HE染色:NS组第7、14、28天,肺泡结构正常。BLM组:随着时间进展,肺泡结构被胶原纤维填充,肺泡间隔增厚,充血、出血范围增大,炎症细胞浸润。DMSO组表现与BLM组基本相似。MG132组,第7天,肺泡结构稍有破坏,少量炎症细胞浸润;第14、28,肺泡结构破坏明显,肺泡间隔增厚、大量炎症细胞浸润,但程度都较BLM组轻。(2)Masson染色:NS组第7、14、28天,肺泡结构正常,未见明显的蓝色胶原沉积(P>0.05)。BLM组,随着时间进展,肺泡结构破坏明显,大量蓝色胶原纤维沉积,肺泡间隔增厚明显,与NS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。DMSO组表现与BLM组基本相似(P>0.05)。MG132组,肺泡结构有破坏,蓝色胶原纤维沉积,肺泡间隔增厚,但程度介于NS组与BLM组之间,组间差异有统计学意义(P<0.05)。4、Ashcroft评分:NS组在各时间点Ashcroft评分相似(P>0.05)。BLM组,与NS组相比,第7天、14天、28天,Ashcroft评分增加明显(P<0.05)。DMSO组,Ashcroft评分与BLM组相似,差异无统计学意义(P>0.05)。MG132组,Ashcroft评分较BLM组减少(P<0.05),较NS组增加(P<0.05)。5、分子机制:(1)免疫组化(CD31、α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smurf2、SnoN表达量),随时间进展,与NS组比较,BLM组中α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smurf2表达逐渐增加(P<0.05),CD31、SnoN表达逐渐减少(P<0.05)。DMSO组中各抗体的阳性表达区域与BLM组基本相似(P>0.05)。MG132组中各抗体的阳性表达区域介于BLM组与NS组之间(P<0.05)。(2)Western blot(CD31、α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smurf2、SnoN表达量),第7、14、28天,与NS组比较,BLM组中α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smurf2表达逐渐增加,CD31、SnoN表达逐渐减少。DMSO组中各抗体的表达量与BLM组基本相似。MG132组中各抗体的表达量介于BLM组与NS组之间。(3)qRT-PCR(Smurf2、SnoN):在各组及各个时间段,SnoN的mRNA表达无明显差异(P>0.05)。与NS组相比,BLM组中Smurf2的mRNA表达显著上调(P<0.05);DMSO组Smurf2的mRNA表达与BLM组相似(P>0.05);MG132组,Smurf2的mRNA表达与BLM组相似(P>0.05)。结论:1、采用气管内注射博来霉素的方法可成功构建肺纤维化大鼠模型。2、MG132可减轻炎症反应、胶原沉积,对肺纤维化大鼠有治疗作用。3、MG132可能通过调节Smurf2-SnoN信号传导,影响TGF-β1/Smad通路,从而延缓肺纤维化。