脂肪组织工程种子细胞筛选的体外实验研究

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目的 培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)和皮下脂肪来源前脂肪细胞(preadipocyte,Pra);筛选适合于脂肪组织工程的MSCs诱导成脂条件;观察和分析人MSCs成脂诱导分化过程;识别、鉴定由人MSCs诱导的前脂肪细胞(differentiated bone marrow mesenchymal stem cells,DBM);比较人Pra与DBM的增殖及成脂分化能力,从中为脂肪组织工程筛选出比较理想的种子细胞。并进一步分析筛选出的种子细胞在体外扩增阶段,不同代次细胞的老化程度,为脂肪组织工程选择合适代次的种子细胞提供部分实验依据。方法 选拟行矫形手术的成人(18~40ys)志愿者,于术中取切口皮下脂肪组织及髂嵴骨髓组织,体外进行人MSCs和Pra原代培养及传代扩增。结合成骨诱导分化(DMEM+10%胎牛血清+10-8mol/L地塞米松+10mmol/LΒ—甘油磷酸钠+50ug/ml Vit—C,持续诱导3周)及免疫荧光流式细胞术(CD44、CD34抗体),对人MSCs进行鉴定。通过诱导成脂分化及S-100、脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein,aP2)的免疫细胞化学方法鉴定人Pra。以DMEM、地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、吲哚美辛复合诱导剂,体外诱导人MSCs成脂分化,观察分化过程形态学变化,有、无血清及细胞融合程度对成脂分化的影响。从形态学变化方面初步判定人MSCs诱导进入前
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