桔霉素分子印迹仿生酶联免疫检测方法研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:chuanqi111
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本研究采用本体聚合方法以3,5-二羟基-2-萘甲酸为假模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,在酶标板孔表面直接紫外引发合成了对桔霉素分子印迹聚合物膜,成功将分子印迹技术应用于免疫分析中,建立了一种食品中桔霉素分子印迹仿生酶联免疫吸附法。研究对分子印迹膜合成参数和条件进行了详细优化,并通过扫描电镜对分子印迹膜进行了结构表征。并且,通过平衡结合实验和吸附动力学实验考察了分子印迹膜的吸附性能。实验结果表明:所合成的分子印迹聚合物膜对桔霉素具有良好的特异性吸附能力和较快的吸附速度。印迹膜饱和吸附容量达到1.07 μgwell-1,明显高于非印迹聚合物膜(0.213 μgwell-1)。当桔霉素浓度为50 mgL-1时,10 min内可达到最大吸附容量的54.9%;30 min时可达到最大吸附容量的97.3%;吸附40 min达到吸附平衡。研究以此分子印迹膜为仿生抗体,针对桔霉素建立了直接竞争仿生酶联免疫分析法。在优化的实验条件下,方法灵敏度(IC50)和最低检出限(IC15)分别达到109.20μgL-1和0.50μgL-1。对谷物中的五种生物毒素的交叉反应率均不超过4.7%。此方法被成功地应用于米饭,玉米,米醋三种样品中的桔霉素的分析检测,三个添加浓度下的回收率分别达到73.2%-89.9%,64.3-86.2%和82.3-92.8%。与高效液相色谱方法检测结果相比,检测结果具有很好的一致性,相关系数为0.9942。本研究内容为食品样品中桔霉素检测提供了一种稳定、可行、低成本的检测方法。
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