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【目的】通过分析转染携带有HBV基因全长质粒payw1.2、HBV X区突变基因全长质粒payw*7、HBX基因质粒pcDNA3.1-FLAG-HBX、空载质粒pcDNA3.1的肝细胞及正常肝细胞在CsA作用前后ROS的变化、RIP3、TNFα、NF-κBP65、IL-6、AST/ALT表达量的改变,从而研究HBx是否通过调节MPTP从而诱导HL7702细胞损伤。【方法】脂质体lipo3000分别瞬时转染HL7702细胞payw1.2、payw*7、pcDNA3.1-FLAG-HBX、pcDNA3.1,通过RT-PCR分析上述质粒转染后是否有HBX RNA表达;ELISA法检测HBsAg在细胞上清液中的表达情况;CCK8法分析瞬时转染各组质粒模拟急性炎症过程中HBx是否能促进HL7702细胞的增殖,并确定在后续实验中MPTP特异性抑制剂CsA的最佳药物使用浓度;利用DCFH-DA探针装载细胞内的ROS,先在荧光显微镜观察各组细胞内ROS的探针装载情况,后用流式细胞术定量检测细胞内的平均荧光强度,验证HBx是否调节细胞内ROS以及CsA药物作用后能否有效降低细胞内ROS水平;ELISA法测定各实验组在CsA作用前后细胞上清液中AST/ALT IL-6与TNFα的含量;Western-blot法分析各实验组胞在CsA作用前后细胞内NF-κBP65、RIP3的表达水平。【结果】RT-PCR及ELISA的结果分别证实payw1.2、payw*7、pCDNA3.1-FLAG-HBX、pCDNA3.1各质粒均已转染成功,HBx可以有效促进HBV在HL7702细胞内的复制,由此可作为后续实验的基础;CCK8法分析发现HBx可以明显促进HL7702细胞的增殖,且CsA对HL7702细胞的作用呈剂量依赖性,药物浓度为0.25umol/l时效果最显著;HBx可明显提高细胞内的ROS水平,且在0.25umol/L CsA作用下,细胞内ROS水平可明显降低;Western blot法及ELISA法分析HBx可有效上调细胞内NF-κBP65、RIP3、TNFα的表达水平,且这一作用可被CsA有效抑制;HBx可明显上调HL7702细胞的AST/ALT比值,但这一作用没有体现在HBV全长基因转染情况下,而在HBV全长基因的情况下研究发现HBx可明显上调细胞上清液中的IL-6的含量,但在单独转染HBV X区基因后,IL-6的含量未见明显改变。且在CsA作用前后上述两个指标AST/ALT及IL-6的含量均无明显改变。【结论】HBx通过诱导MPTP的持续性开放,增加了HL7702细胞内的ROS蓄积,从而促进了细胞的炎症坏死;MPTP孔道的非特异性持续开放不是唯一的促HL7702细胞炎症损伤和坏死的途径。