论文部分内容阅读
目的:骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种全球范围内常见的关节退化性疾病,不仅给患者带来身体上的痛苦也给国家医疗体系带来巨大的经济负担,如今对于骨关节炎的治疗多以缓解症状的药物和手术为主,寻找到一种安全有效且无创的治疗方法显得十分必要。冲击波是一种在介质中传播的机械波,作为一种理疗设备其疗效已在多种疾病中得到验证,有不少基础和临床的研究表明经过冲击波干预的膝骨关节炎模型细胞、动物或临床患者表现出较单纯骨关节炎更好的抗炎,抵抗降解酶降解的组织保护现象,维持了关节中软骨软骨下骨的结构完整性,是一种有效的骨关节炎辅助治疗方法,但是冲击波并没有在现如今的骨关节炎治疗中得到广泛应用,其原因可能在于,冲击波的相关临床介入标准时间、剂量、干预次数并没有一个明确权威的验证。本实验在成功建立大鼠骨关节炎模型后,将骨关节炎大鼠分组接受相同剂量但不同次数的冲击波干预,通过与各自骨关节炎对照组关节软骨结构和软骨中CollagenⅡ及Aggrecan表达情况的对比,观察何种冲击波干预次数对于骨关节炎大鼠模型具有更好的效果;以及冲击波干预效果是否是通过保护骨关节炎软骨组织产生的,本实验通过讨论冲击波干预次数与治疗效果之间的关系,以期能够进一步推动冲击波对骨关节炎患者干预的临床标准化应用。方法:将25只清洁级雄性SD大鼠分为正常对照组（n=5）冲击波组（n=10）以各自对应的单纯OA对照组（n=10）。适应性喂养一周后,除正常组外的所有实验大鼠,禁食过夜,使用Hulth法去除左侧膝关节内侧半月板前1/3及前叉韧带,术后一周伤口愈合后,对冲击波组进行冲击波干预,干预剂量为1.0bar,6Hz,800次,靶点位于左膝内侧胫骨下骨,随后根据冲击波干预次数的不同将冲击波组又分为冲击波干预4周组（SW4,n=5）和6周组（SW6,n=5）,单纯OA对照组（OA4,n=5;OA6,n=5）与各冲击波组对应。各组试验周期结束后进行Lequnce MG行为学评价,HE及番红固绿染色评价软骨形态、分析免疫组化CollagenⅡ和Aggrecan数据、电镜观察股骨软骨表面形态。结果:1.各组在Lequence MG行为学评分中存在差异（8.612,P=0.035<0.05）,其中在6周组中,SW6组的大鼠Lequesene MG评分较未经干预的OA6组大鼠降低明显,其之间差距存在统计学意义（#14.958,P=0.005<0.05）;2.电镜下正常对照组中软骨结构表面平整光滑,结构紧密,高倍观察下可见规则清晰的胶原纤维排列,OA4组软骨表面粗糙,表面存在不规则突起,高倍镜下观察胶原纤维暴露,间隙增大,OA6组软骨组织表面结构破坏严重,表层胶原纤维暴露明显可见深层纤维组织,锯齿状大片断裂;SW4组大鼠镜下观察轻度粗糙,胶原纤维排列较为规则,间隙轻度增大,与OA4组相比破坏程度减轻;SW6组大鼠软骨表面结构破坏较0A6组相比减轻,存在不规则的深层纤维暴露但胶原纤维暴露深度及组织碎片大小;3.HE染色结果观察到在正常大鼠关节软骨中,关节软骨表面光滑平整,无炎性细胞浸润,无血管神经浸润,关节软骨分层明显,细胞排列有序。OA4组中软骨表面粗糙,不平整,软骨细胞增生明显,多个软骨细胞成簇聚集增殖,垂直排列,钙化软骨层比例减少;SW4组软骨表面轻微粗糙,软骨细胞增生明显,结构层次清楚完整,潮线清楚;OA6组表面裂痕深入软骨层,软骨细胞及软骨基质丢失,潮线不完整;S W6组软骨表面凹凸不平,分层不明显,潮线消失,软骨细胞增生明显但结构混乱,带有血管的纤维组织增生;4.根据番红固绿染色对各组进行了OARSI骨关节炎软骨组织病理学评分,各组之间的OARSI评分存在差异（18.236,P=0.001<0.05）,骨关节炎组与正常组之间OARSI评分均存在统计学差异（N与OA4:-11.625,P=0.005<0.05;N与OA6:-15.625,P=0.0001<0.05）,冲击波干预四周组OARSI评分与其对照组之间存在统计学差异（8.375,P=0.044<0.05）冲击波干预六周组与对照组之间虽P值与0.05相近但以α=0.05为标准,不存在统计学意义（8.0,P=0.054>0.05）;5.免疫组化分析中,CollangeⅡ软骨中表达在正常对照组与骨关节炎对照组之间均存在统计学差异（N与OA4:11.250,P=0.007<0.05;N与OA6:15.250,P=0.0001<0.05）,四周组中冲击波干预组与其对照组之间存在统计学差异（-8.75,P=0.036<0.05）而六周干预组与对照组之间统计学差异不明显（-8.00,P=0.056>0.05）;在软骨中Aggrecan的表达情况中N组与OA4组之间存在统计学差异（12.125,P=0.004<0.05）,N组与OA6组之间同样存在统计学差异:（15.625,P=0.0001<0.05）,四周组中冲击波干预组与其对照组之间存在统计学差异（-8.25,P=0.048<0.05）而六周干预组与对照组之间统计学差异不明显（-7.875,P=0.06>0.05）。结论:1.冲击波能够对骨关节炎大鼠起到治疗作用,能够改善行为学表现减缓软骨退变过程保护软骨结构并且促进软骨细胞外基质CollagenⅡ和Aggrecan的表达。2.骨关节炎早期介入冲击波,与六周相比四周的冲击波干预疗程更为适合。