【摘 要】
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野生柞蚕(Antheraea pernyi)幼虫的体色为青色,经过长期的自然和人工选择,形成了青黄色、黄色、蓝色和白色4大体色血统。在实践生产中,幼虫体色一直是柞蚕育种的重要形态标记性状。然而关于柞蚕幼虫体色分化的分子机制仍知之甚少,目前为止未见有与柞蚕幼虫体色相关基因被克隆的报道。鳞翅目幼虫呈现出绿色,是因为他们体内存在一种蓝色色素,即胆绿素(Bilins),胆绿素与蛋白质结合形成胆绿素结合蛋白
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野生柞蚕(Antheraea pernyi)幼虫的体色为青色,经过长期的自然和人工选择,形成了青黄色、黄色、蓝色和白色4大体色血统。在实践生产中,幼虫体色一直是柞蚕育种的重要形态标记性状。然而关于柞蚕幼虫体色分化的分子机制仍知之甚少,目前为止未见有与柞蚕幼虫体色相关基因被克隆的报道。鳞翅目幼虫呈现出绿色,是因为他们体内存在一种蓝色色素,即胆绿素(Bilins),胆绿素与蛋白质结合形成胆绿素结合蛋白(Bilin Binding Protein,BBP)。胆绿素还原酶B(Biliverdin reductase B,BVRB)可催化血红素降解过程中产生的胆绿素还原成胆红素。本研究利用柞蚕青蚕品种选大与黄蚕品种沈黄杂交,选取F2代中青、黄个体的5龄第10天幼虫的体壁,使用Illumina测序平台对其进行转录组测序,利用GO、COG、eggNOG和KEGG对差异表达基因进行功能注释;利用Nr数据库的注释结果筛选柞蚕幼虫体色相关基因。这些基因的鉴定,为进一步研究他们的功能及青蚕与黄蚕体色分化的分子机制奠定了基础。主要研究结果如下:1.从柞蚕青、黄幼虫的体壁转录组数据库共得到9.16 Gb Clean data,COG、KEGG、Go和eggNOG分类中差异表达的unigene分别为412、452、590和970个;剔除未注释基因,在Nr数据库中共筛选到972个差异表达基因,其中上调部分为410个,下调部分为562个。2.基于转录组数据,共筛选到胆绿素相关基因8个,其中包括胆绿素结合蛋白(BBP)基因5个,载脂蛋白D(apolipoprotein D)基因1个,类虫青素蛋白基因1个(insecticyanin A-like protein)和胆绿素还原酶基因B(Biliverdin reductase B,BVRB)1个。论文完成了3个胆绿素相关基因(ApBBP1,ApBBP2和ApBVRB)的克隆,他们在所有受试的青、黄蚕个体的组织器官中均有表达;ApBBP1和ApBBP2在体壁中的表达量具有显著差异;qRT-PCR结果表明,ApBBP1和ApBBP2可能在柞蚕青、黄幼虫体色分化中起关键作用。3.胆绿素还原酶活性分析结果表明,青蚕幼虫血淋巴、丝腺和脂肪体中的酶活性高于黄蚕,且在青、黄幼虫个体之间的血淋巴与丝腺存在极显著差异,推测可能由于血淋巴中酶活性而导致柞蚕幼虫青、黄体色差异。
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