【摘 要】
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[目 的]本课题对三七中的肽类成分进行初步富集、对三七素进行去除,为制备不同三七产品时的提取纯化工艺提供参考。[方 法]本课题建立了三七中氨基酸类成分检测方法,所建立的方法有:（1）柱前衍生化HPLC-UV法测定三七药材、三七提取物中三七素、游离氨基酸含量;（2）柱前衍生化HPLC-UV法测定三七提取物中总氨基酸含量:①盐酸水解法测15种氨基酸含量;②氢氧化钠水解法测色氨酸含量;③过氧甲酸氧化酸水
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[目 的]本课题对三七中的肽类成分进行初步富集、对三七素进行去除,为制备不同三七产品时的提取纯化工艺提供参考。[方 法]本课题建立了三七中氨基酸类成分检测方法,所建立的方法有:（1）柱前衍生化HPLC-UV法测定三七药材、三七提取物中三七素、游离氨基酸含量;（2）柱前衍生化HPLC-UV法测定三七提取物中总氨基酸含量:①盐酸水解法测15种氨基酸含量;②氢氧化钠水解法测色氨酸含量;③过氧甲酸氧化酸水解法测甲硫氨酸、胱氨酸含量;（3）考马斯亮蓝法检测三七提取物中蛋白质含量;（4）HPLC-UV法、LC-MS法检测三七提取物中的环二肽。本课题以水解前游离氨基酸含量和水解后的总氨基酸含量的差值检测三七中肽类成分,以三七主根为原料,经70%乙醇回流提取、HPD100大孔树脂、C18层析富集三七中肽类成分;以三七主根为原料,经70%乙醇回流提取、HPD100大孔树脂层析、醇沉法去除三七中的三七素成分。[结 果]本课题建立的柱前衍生化HPLC-UV法检测三七中氨基酸含量,19种氨基酸进样量在0.00208-1.20600μg范围内线性关系良好;氨基酸的平均回收率在88.771%～104.760%之间,RSD在2.731%～5.454%之间（n=9）。建立的考马斯亮蓝法检测三七中蛋白质含量,蛋白质浓度在0.00347-0.01733mg/ml范围内线性关系良好;蛋白质的平均回收率为 101.852%,RSD 为 2.346%（n=9）。三七主根经70%乙醇回流提取,提取液经HPD100大孔树脂、C18层析,肽类成分富集在C18 15%甲醇洗脱物中,含量为3.25%;三七70%乙醇提取物经HPD100、醇沉法分离后,80%乙醇洗脱物中三七素含量为0.003%,醇沉沉淀中三七素含量为0.155%,三七素大量存在于醇沉上清液中,含量高达3.623%。[结 论]本课题建立的柱前衍生化HPLC-UV法检测三七中氨基酸含量、考马斯亮蓝法检测三七中蛋白质含量,方法准确、可靠,适用于三七中氨基酸、蛋白质的检测。本课题富集三七肽类成分意在富集环二肽成分,三七70%乙醇提取物经HPD100大孔树脂、C18层析,肽类成分富集在C18 15%甲醇洗脱物中,因时间有限,没有做更多的研究,后续的研究应采用更多的分离材料及仪器富集环二肽。三七素具有止血活性,但存在神经毒作用（可致命或产生慢性中毒）,在制备不以止血作用为目的的三七产品时应对其含量进行控制,本课题将三七70%乙醇提取物经HPD100大孔树脂层析后,明显降低了三七皂苷中三七素含量,HPD100大孔树脂水洗脱液经醇沉法分离后,明显降低了三七多糖中三七素含量。本课题为制备不同三七产品的提取纯化工艺提供了参考。
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