不同途径移植胰岛样细胞对于1型糖尿病鼠的作用研究

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目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病鼠的治疗效果。方法:1.采用组织贴壁法分离培养hUC-MSCs,并对其表面标记物和向成骨、成脂肪细胞分化能力进行检测;2.采用四步诱导法,诱导hUC-MSC向ILCs分化;3.ILCs的鉴定:双硫腙染色、C肽含量、以及胰岛β相关基因Insulin、PDX1mRNA相对表达含量进行检测;4.雄性C57BL/6J小鼠,连续5 d腹腔注射55 mg/kg链脲佐菌素,制备1型糖尿病模型鼠;5.采用尾静脉和腹腔2种移植方式,将ILCs细胞悬液(含5×10~5个细胞)移植于1型糖尿病鼠体内。分为正常组、糖尿病组、尾静脉-ILCs组、腹腔-ILCs组;6.对移植后各组小鼠,进行血糖、胰岛素水平和葡萄糖耐量试验检测。结果:1.培养出的hUC-MSCs呈梭形,并以漩涡状生长。表面标志物CD90、CD44、CD29、CD34、CD45的阳性率分别为99.2%、99.8%、100.0%,0.0%、0.1%,可分化为骨细胞、脂肪细胞;2.hUC-MSCs经四步法诱导后,细胞形态由梭形转变为圆形,并有大量ILCs团出现;3.ILCs经双硫腙染色变为红棕色;4.低糖、高糖条件下刺激ILCs,C肽表达含量分别为0.528 ng/mL、0.785 ng/mL,(P<0.05);5.ILCs的Insulin、PDX1 mRNA相对表达含量显著高于未诱导的hUC-MSCs,(P<0.001);6.与糖尿组相比,尾静脉-ILCs组在移植后第10 d血糖开始明显下降,一直维持到31 d,胰岛素水平升高,葡萄糖耐量改善,(P<0.05)。而腹腔-ILCs组血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量未见明显改善。结论:1.采用组织贴壁法,成功培养出hUC-MSCs;2.四步法诱导hUC-MSCs,成功获得具有功能性的ILCs;3.尾静脉移植ILCs比腹腔移植效果好。
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