【摘 要】
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蛋白质的可逆磷酸化是真核生物机体内极其重要的生物事件,它主要参与调控DNA损伤、细胞增殖、新陈代谢甚至癌变。蛋白质的可逆磷酸化是由蛋白激酶和蛋白磷酸酶行使的,而且两
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蛋白质的可逆磷酸化是真核生物机体内极其重要的生物事件,它主要参与调控DNA损伤、细胞增殖、新陈代谢甚至癌变。蛋白质的可逆磷酸化是由蛋白激酶和蛋白磷酸酶行使的,而且两者的种类都很丰富。其中蛋白磷酸酶-2A (protein phosphatase-2A, PP-2A)是动物体内含量最丰富的蛋白磷酸酶之一蛋白磷酸酶-2A (PP-2A)是一种包含了催化亚基C (PP-2Ac),调节亚基B (PP-2Ab),支撑亚基A (PP-2Aa)的全酶。其中催化亚基是蛋白磷酸酶-2A (PP-2A)的基本结构,蛋白磷酸酶-2Ac (PP-2Ac)则包含两种异构体:蛋白磷酸酶-2Acα(PP-2Acα)与蛋白磷酸酶-2Acβ (PP-2Acp)。本文以其中的一种异构体蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)为主要研究对象,提取金鱼胚胎发育12个时期(二细胞时期、多细胞时期、囊胚时期、原肠胚时期、神经胚时期、视原基时期、脑泡时期、肌肉效应时期、心跳时期、眼色素时期、体色素时期、出膜时期)和九种组织(精巢、大脑、肾脏、鳍、心脏、鳃、肌肉、肝脏以及卵巢等)的RNA,利用RT-PCR技术检测了蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)在金鱼胚胎发育的12个时期和九种不同组织中的表达模式,得出以下结论:1)在]mRNA水平上,蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)在视原基时期表达最强,且远远高于其它发育时期的表达水平,在肌肉效应期中的表达次之,多细胞时期、囊胚时期、原肠胚时期、眼色素时期、出膜时期表达较高,二细胞时期,神经胚时期、体色素时期表达较低,脑泡时期和心跳时期表达最低;2)在金鱼的九种不同组织中,蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)均有不同程度的表达,卵巢中表达量最高,心脏次之,在大脑、鳍、肌肉三种组织中的表达水平相对较高,肾脏、肝脏、鳃和精巢中的表达相对较低。这表明蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)基因在金鱼胚胎发育及各组织中有着重要的调控作用。接着对金鱼胚胎进行显微注射特异性的Morpholino Oligomers (MO)来抑制蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)的活性,进一步研究蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)在金鱼胚胎发育中的作用机制。然后用荧光显微镜检测成功注射的胚胎,结果观察到成功注射的金鱼胚胎产生严重的畸形,如胚胎眼睛由于分化模式的改变导致大小异常,胚胎脊柱由于不均等的细胞分裂分化导致弯曲,这进一步说明蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)对胚胎的正常发育的确起着重要的作用。我们进一步利用石蜡切片技术来观察成功注射的金鱼胚胎组织的变化,结果发现眼睛视网膜和晶状体等主要部位发育异常,大脑出现畸形等。由此可见,通过向金鱼胚胎显微注射MO来抑制蛋白磷酸酶-2Acβ(PP-2Acβ)的表达,使胚胎产生了各种明显的畸形,说明蛋白磷酸酶-2A (PP-2A)是金鱼体内重要的蛋白磷酸酶之一,对金鱼的胚胎发育起着重要的调控作用。
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