珙桐产黄酮内生真菌的分离及鉴定

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珙桐(Davidia involucrate Baill.)为我国特有的第三纪古热带植物的孑遗树种,被列为我国一级保护植物。研究表明,珙桐叶提取物中含有槲皮素、山奈酚等黄酮类物质。本研究从内生真菌的角度出发,对珙桐中的内生真菌进行研究,结果如下:1、采用组织分离法从珙桐组织中分离了126株内生真菌。经对比实验,内生真菌分离时,植物组织的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞结合的方法较好;对珙桐茎部的升汞消毒时间以4~5min为宜,珙桐叶子的升汞消毒时间应控制在2min左右。珙桐中分离到的126株内生真菌主要分布在树叶和茎中。2、以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coil)为测试菌种,对初选的126株珙桐内生真菌进行代谢产物活性筛选。其产物对三种细菌的抑菌率分别为65%、71%、25%,其中D37菌株对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。3、对具抑菌活性的菌株D37进行液体发酵。经高效液相色谱(High PerformanceLiquid Chromatography,HPLC)分析证明菌株D37的次生代谢产物中含有槲皮素、山奈酚二种黄酮类物质,每100g干菌丝可产黄酮31.9mg/100g。4、根据菌株D37的形态学特征,结合核糖体内部转录序列(intemal transcribedspacer,ITS)的测定结果,确定菌株D37为曲霉属,烟曲霉种(Aspergillus fumigatus)。本文从珙桐分离的产黄酮内生真菌D37即可作为生产黄酮类药物的候选菌株,此外,分离到的126株内生真菌是进一步进行分离其它生物活性物质、进行抗菌及药物等研究的资源库。
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