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目的：(1)通过对湘雅医院住院病人腹泻患者粪便标本中的艰难梭菌进行筛查和不同时期检出率的比较,了解该院腹泻患者艰难梭菌的感染情况。(2)构建艰难梭菌毒素B受体结合区原核表达载体,诱导目的蛋白表达。方法：(1)收集2009年2月-12月和2011年4月-7月湘雅医院住院患者腹泻病人粪便标本106份,进行厌氧培养和API鉴定,对培养鉴定获得的菌株应用PCR扩增方法进行A、B毒素及二元毒素基因检测,应用酶联荧光免疫法进行毒素A/B检测。(2)提取艰难梭菌基因组DNA, PCR扩增艰难梭菌毒素B受体结合区(CDB3)基因片段,构建原核表达载体pGEX4T-CDB3, IPTG诱导目的蛋白表达,采用SDS-PAGE及Western blot验证蛋白表达情况。结果：(1)106份标本中,厌氧培养阳性率为15.09%(16/106);培养阳性的菌株PCR扩增A、B毒素基因均为阳性,而二元毒素基因均为阴性：直接毒素A/B检测阳性率为12.26%(13/106)。2009年和2011年两个时期标本艰难梭菌检出情况的比较,厌氧培养阳性率分别为22.81%(13/57)、6.12%(3/49),两者差异有统计学意义;PCR毒素检测阳性率分别为22.81%(13/57)、6.12%(3/49),两者差异有统计学意义;毒素A/B检出率分别为17.54%(10/57)、6.12%(3/49),差异无统计学意义。分析阳性患者临床资料发现,他们住院期间用过头孢类、喹诺酮类、碳青霉烯类、广谱青霉素、克林霉素等其中的一种或多种抗生素。(2)经PCR、酶切及基因测序验证,原核表达载体pGEX-4T-1-CDB3构建成功,诱导表达后获得97KD左右的目的蛋白。结论：(1)我院艰难梭菌相关性腹泻比较严重,抗生素的使用是诱使艰难梭菌感染的重要因素。(2)成功构建原核表达载体pGEX-4T-1-CDB3,且目的蛋白获得大量表达。