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背景:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是发生于全身大中型动脉血管的致命性病变,是导致心肌梗塞和脑梗塞等疾病发生的主要因素。研究表明,AS主要发生于动脉血管的局部性区域,即动脉血管的弯曲处和分叉处。学界认为局部性血流动力学因素所导致的动脉血管内皮损伤是AS形成的一个重要原因。研究发现,在血流动力学信号传导的过程中,内皮细胞纤毛(Cilia)起着关键性作用。其中,主要位于纤毛上的离子通道调控蛋白PKD2[polycystic kidney disease 2(autosomal dominant)]在血管内皮细胞生物学行为和管腔功能稳态维持中起着重要的作用。前期研究结果显示:低振荡剪切应力(OS)可显著地抑制内皮细胞PKD2蛋白的表达,进而导致血管功能障碍乃至AS的形成。同时,已有的研究表明氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)是导致的动脉血管内皮损伤以及AS形成的一个重要原因。那么,Ox-LDL促血管内皮损伤及AS形成是否是通过抑制PKD2蛋白的表达及其功能途径?为此,本文开展了Ox-LDL对血管内皮细胞PKD2蛋白表达及其功能影响的研究。目的:以血管内皮细胞PKD2蛋白功能为研究对象,确定Ox-LDL对PKD2蛋白表达及其功能的影响,以及PKD2调控e NOS的活性的分子信号机制。研究方法:采用实时定量PCR(RT-PCR)检测PKD2和Ca MKKβ等基因的表达水平;免疫荧光染色法(ICC)、Western blotting等方法检测PKD2、Ca MKKβ、p-AMPK、AMPK、p-e NOS蛋白的表达和活性。结果:(1)Ox-LDL可显著抑制内皮细胞PKD2的基因和蛋白表达水平,以及e NOS活性。(2)内皮细胞PKD2基因沉默(si RNA)可显著抑制PKD2的基因和蛋白表达水平,以及PKD2下游靶基因Ca MKKβ、p-AMPK等蛋白的表达和e NOS活性。(3)体外实验初步显示:Ox-LDL可显著抑制PKD2下游靶基因Ca MKKβ的基因表达水平以及AMPK的磷酸化;AMPK的激活剂AICAR可部分补救Ox-LDL下调的PKD2下游靶基因AMPK和e NOS的活性。体内实验证明:长期高脂喂食可显著增加Apo E-/-小鼠的体重和血脂水平,抑制PKD2基因的表达水平。结论:(1)Ox-LDL可抑制内皮细胞PKD2的基因和蛋白表达水平,以及e NOS的活性。(2)Ox-LDL可能通过PKD2信号途径下调内皮细胞e NOS的活性,进而参与血管内皮损伤及动脉粥样硬化的形成。