基于Akt/mTOR信号通路的叶黄素对结肠癌HT29细胞增殖抑制作用的研究

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目的:结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,在胃肠道肿瘤中排名第二位。目前全世界每年新增结肠癌患者超过百万人,结肠癌发病率高,其死亡率在肿瘤中排名第三位。近年来,随着我国人民生活习惯的改变,结肠癌在我国的发病率正在迅速提高,其上升速度为每年4.1%,远远超过2%的国际水平,已严重威胁病人的生命。结肠癌的发生是一个多因素共同作用的结果,并且发病隐匿、迅速,患者生存周期较短。目前对结肠癌的治疗手段主要是切除、化疗和放疗,治疗手段单一,且效果并不理想,病人术后易复发。因此,寻找一种新型、高效、低毒的天然植物药物对于结肠癌的防治具有重要意义。  叶黄素主要存在于瓜果蔬菜中,是一种类胡萝卜素。叶黄素具有预防白内障,保护视力以及抗氧化的功能。同时,其在延缓动脉硬化以及抗肿瘤方面也存在着重要的作用。本实验室前期实验已证实:叶黄素在达到一定浓度之后,可显著抑制胃癌、肝癌及食管癌细胞的增殖。本研究旨在探讨叶黄素对人结肠癌HT29细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制。  方法:采用SRB法绘制人结肠癌HT29细胞8 d的生长曲线;在HT29细胞培养液中加入不同浓度的叶黄素,分别于培养24、48、72 h后,采用SRB法检测叶黄素对人结肠癌 HT29细胞增殖情况的影响;采用倒置显微镜观察叶黄素对HT29细胞形态的影响;采用流式细胞仪检测叶黄素对HT29细胞周期的影响;用不同浓度的叶黄素处理HT29细胞48 h后,采用Western blot检测细胞内AKT和 mTOR蛋白的磷酸化水平、eIF4E表达水平的变化;采用 RT-PCR检测细胞eIF4E mRNA表达的情况。  结果:SRB法检测结果显示,叶黄素能明显抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并具有时间依赖性和剂量依赖性。浓度为40 mg/L的叶黄素作用HT29细胞24h、48 h和72 h后,其抑制率分别为12.04%,19.10%和33.50%。将叶黄素浓度增加到160 mg/L后,其抑制率分别提高到28.90%,61.76%和84.84%。流式细胞仪检测HT29细胞周期结果显示,叶黄素作用HT29细胞48 h后,HT29细胞周期发生明显阻滞,G0/G1期细胞比例大幅上升。Western blot检测结果显示,叶黄素作用HT29细胞48 h后,ATK蛋白的磷酸化水平降低,mTOR蛋白的磷酸化水平亦降低,eIF4E的表达水平下调,且均具有剂量依赖性。RT-PCR检测结果表明,叶黄素作用HT29细胞48 h后,细胞内eIF4E mRNA的表达下调,说明叶黄素可能影响eIF4E基因的转录和表达。  结论:叶黄素可以显著抑制人结肠癌HT29细胞的增殖。其作用机制可能与阻滞细胞于G0/G1期,下调AKT通路中ATK和mTOR蛋白的磷酸化水平,下调eIF4E蛋白的表达,下调 eIF4E mRNA的表达有关。
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