RNAi沉默血管平滑肌细胞Rab5a蛋白抑制血管内膜增生的实验研究

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目的:血管内膜增生(Intima Hyperplisa, IH)是血管重建术(血管移植、动脉球囊成形术等)后严重而常见的并发症,常导致血管的再狭窄。业已证明,血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移是血管内膜增生病理过程中的早期表现,也是其关键一环。在我们既往的研究中发现血管平滑肌细胞中Rab5a蛋白表达有明显升高。本研究探讨Rab5a蛋白与血管内膜增生的关系,通过RNAi技术沉默Rab5a蛋白表达,抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移,以期达到抑制内膜增生的目的。方法:(1)通过颈静脉桥接移植颈动脉方法建立大鼠血管内膜增生模型,利用Westernblot检测不同时间节点(术后第7天、第14天、第28天)血管吻合口组织中Rab5a蛋白的表达情况,并绘制血管内膜增生时间-Rab5a蛋白表达曲线;扫描电镜观察吻合口血管内膜中平滑肌细胞超微结构的变化。(2)自大鼠胸主动脉分离血管平滑肌细胞并通过离体培养、传代,利用realtime PCR和Vesternblot检测RNAi前后血管平滑肌细胞Rab5a表达量的变化;利用流式细胞仪和Transwell技术,检测RNAi前后血管平滑肌细胞增殖及迁移能力的改变。结果:(1)吻合口血管的内/中膜比例提示动物模型血管重建术后内膜增生明显,检测组织中Rab5a蛋白的表达在术后14天达到峰值。(2)培养、传代的血管平滑肌细胞中Rab5a蛋白表达明显上升;利用RNAi能有效下调Rab5a的表达。(3)在体外实验中,下调Rab5a蛋白表达有抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移的作用。结论:(1)内膜增生过程中血管平滑肌细胞异常表达Rab5a蛋白。(2)在体外实验中,通过RNAi下调Rab5a蛋白表达,可以抑制平滑肌细胞增殖、迁移。(3) Rab5a蛋白与血管内膜增生有关,为研究血管内膜增生的病因学,提供了新的理念;为预防和治疗血管重建术后再狭窄,寻找新的思路,提出了基因治疗、分子治疗策略的新证据。
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