【摘 要】
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在母鸡输卵管子宫阴道交接部及漏斗部存在一特殊的管状腺,能够使鸡精子长期存活并保持受精能力,因其具有长期贮存精子的能力,而被称为贮精腺,前期研究表明,NPY基因是禽类子宫
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在母鸡输卵管子宫阴道交接部及漏斗部存在一特殊的管状腺,能够使鸡精子长期存活并保持受精能力,因其具有长期贮存精子的能力,而被称为贮精腺,前期研究表明,NPY基因是禽类子宫阴道交接部的差异表达基因,推测母鸡生殖道中的NPY可能参与调控精子活力。本试验利用免疫组织化学法检测NPY、NPY受体(NPY1R和NPY5R)在产蛋期母鸡生殖道的分布,结果表明NPY和NPY1R在母鸡生殖道的表达比较一致,NPY和NPY1R在漏斗部、峡部、膨大部及子宫的粘膜上皮均有表达,且NPY在漏斗部粘膜上皮阳性信号最强,其次为膨大部和峡部,而NPY1R在膨大部和峡部粘膜上皮的阳性信号最强。用鸡NPY及其受体NPY1R和NPY5R的保守区设计特异性引物,内参基因选择鸡β-actin基因,利用荧光定量分析鸡NPY基因及其受体NPY1R、NPY5R在母鸡输卵管漏斗部、膨大部、峡部、子宫、子宫阴道交接处及阴道的表达。结果发现,NPY在峡部及阴道部的表达量显著高于输卵管其他部位(P<0.05);NPY1R在阴道部的表达量显著高于输卵管其他部位(P<0.05);NPY5R在子宫阴道交接部和阴道的表达量显著高于输卵管其他部位(P<0.05)。根据GenBank上公布的鸡NPY序列合成符合毕赤酵母密码子偏好性的NPY基因,并连接至真核表达载体pPICZαA中,将重组质粒电转至毕赤酵母菌GS115中,用终浓度为1%的甲醇进行诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blot检测,结果表明重组酵母菌成功分泌鸡NPY蛋白,大小约为35kDa。
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