第一部分LPS对足细胞的影响目的:比较基础转录和炎性刺激条件下,足细胞相关基因NPHS1和NPHS2的表达情况,探讨足细胞损伤的可能机制。方法:（1）取传代培养成熟的大鼠足细胞,用LPS作为炎性刺激物,实验细胞为空白对照组和LPS组,LPS采用50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml三个浓度,作用足细胞24小时后用CCK8法分析不同浓度LPS对足细胞增殖活力的影响;（2）根据（1）实验结果选取100μg/ml LPS组与空白组细胞进行实时荧光定量PCR和Western blot水平检测LPS作用后足细胞相关分子NPHS1、NPHS2表达水平;同时采用Western blot测定凋亡蛋白caspase3/9、Bax、bcl-2表达水平;（3）利用流式细胞术观察50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml LPS及其受体抑制剂TAK242作用细胞24小时后对足细胞凋亡的影响。结果:（1）LPS组细胞增殖明显低于对照组（P<0.05）,并呈现剂量效应:其中100μg/ml LPS组比50μg/ml LPS组减低更明显（P<0.01）。200μg/ml LPS组比100μg/ml LPS组作用效果稍强,但两组无统计学差异（P>0.05）;经WB和QPCR检测,在大鼠足细胞中,LPS组足细胞NPHS1、NPHS2 mRNA转录水平及蛋白表达水平均低于对照组（P<0.05）。（2）与对照组比较,用LPS处理的细胞凋亡显著增加,且100μg/ml和200μg/ml LPS处理的细胞凋亡率无显著变化。其中抗凋亡蛋白bcl-2表达显著低于对照组（P<0.01）,促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组（P<0.01）,caspase-9和caspase-3蛋白表达量较对照组明显上调（P<0.01）。（3）用TLR4信号传导抑制剂TAK242处理的细胞,凋亡率较单纯LPS处理组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,细胞凋亡程度基本同对照组一致。结论（1）LPS能够诱导足细胞炎性损伤使细胞增殖活力下降,细胞凋亡增加,该作用与其激活caspase3/9通路和下调NPHS1、NPHS2表达有关。（2）TLR4受体阻断剂可以拮抗LPS诱导凋亡的作用,提示TLR4信号通路可能是LPS诱导大鼠足细胞凋亡的潜在机制,其抑制剂或可有效改善LPS诱导的足细胞损伤。第二部分组蛋白甲基转移酶G9a抑制剂对LPS诱导足细胞损伤的保护作用目的:通过分析炎性刺激条件下足细胞NPHS1、NPHS2基因启动子区H3K9甲基化水平的变化,揭示足细胞组蛋白表观遗传信息在病理损伤过程中的变化规律。方法:（1）取传代培养成熟的大鼠足细胞,实验分为对照组、LPS组及LPS+G9a抑制剂BIX01294组,采用QPCR和Western blot技术检测足细胞相关分子表达水平;利用流式细胞术观察足细胞凋亡率。（2）利用免疫共沉淀法,检测NPHS1、NPHS2等基因的启动子区域H3K9甲基化水平的变化。首先用裂解液对各组细胞裂解后进行超声处理;然后分别用H3K9me2、H3K9me3、RNA Polymerase Ⅱ ChIP级抗体和对照IgG进行孵育后,用Protein G-磁珠沉淀抗体,最后解交联后对NPHS1、NPHS2以及GAPDH等基因的启动子上游区域进行QPCR检测。结果:（1）BIX01294处理组细胞凋亡率较LPS组显著下降（P<0.01）,LPS组足细胞NPHS1、NPHS2基因的表达量显著低于空白对照组（P<0.01,P<0.001）,BIX01294处理组细胞NPHS1、NPHS2基因表达较LPS组增加（P<0.01,P<0.001）。（2）免疫共沉淀结果表明,LPS诱导足细胞后NPHS1、NPHS2启动子区域的H3K9me2、H3K9me3表达量升高,主要是二甲基化水平升高显著（P<0.01）,用G9a甲基化酶抑制剂BIX01294处理足细胞,H3K9二甲基化水平较LPS组显著下降（P<0.01）。结论:（1）组蛋白甲基化介导了LPS对NPHS1、NPHS2等基因的表达抑制。（2）G9a可以通过H3K9me2结合到足细胞NPHS1、NPHS2的启动子区域而发挥作用,G9a甲基化酶的抑制剂BIX01294,可抵抗LPS引起的NPHS1和NPHS2基因启动子区的H3K9二甲基化水平。（3）LPS诱导足细胞凋亡损伤中除启动caspase途径外,组蛋白甲基化也参与了足细胞损伤机制,抑制组蛋白甲基化能够对足细胞发挥保护性作用。