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?布鲁氏菌病(以下简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的人畜共患病,在世界范围内导致巨大的经济损失,布鲁氏菌是该病病原。随着个体养牛户的增加,奶牛布病的疫情呈逐年上升趋势,同时由于布病也可传染给人,从而给人类公共卫生安全造成了严重隐患,因此采取一切措施防治牛布病刻不容缓。为探讨以牛奶为材料检测奶牛布鲁氏菌感染的可行性,本研究在不同牛场收集检测样品包括奶液和血清。试验中首先选用奶液间接ELISA(M-I-ELISA)进行筛选,随后结合间接ELISA做进一步的实验室诊断,最终采用竞争ELISA对被检样品进行确诊。结果显示,Milk-I-ELISA与I-ELISA、C-ELISA具有较高的一致性。Milk-I-ELISA不仅能够检测个体奶样还可以检测混合奶样。本试验中,Milk-I-ELISA检测混合奶样的灵敏度高,在临床检测过程中与血清检测结果保持一致,适合牛群布病感染情况的监测,能够第一时间做出早期诊断。本研究还建立了可鉴定布鲁氏菌属的单重PCR以及鉴定布鲁氏菌种的多重PCR。单重PCR以BCSP31为布鲁氏菌属特异性靶基因为基础,多重PCR的建立方法是以扩增布鲁氏菌长度多态性基因IS711为基础。结果显示,单重PCR方法的特异性强只特异性的扩增布鲁氏菌DNA,对照菌株大肠杆菌、牛败血性波氏杆菌、根瘤农杆菌和苍白杆菌等的扩增结果均为阴性;灵敏度高,奶液中细菌检测灵敏度为1.08×104CFU/mL;用建立的多重PCR对7株不同种来源的布鲁氏菌体和基因组进行鉴定,表明该方法可以区分布鲁氏菌的种和部分生物型。本研究中建立的PCR方法能够鉴定所有致病性布鲁氏菌并对疫苗株和野生毒株加以区分,适用于实验室布鲁氏菌的快速鉴定。综上所述,以奶液为样品,ELISA和PCR方法分别从抗体和病原两个方面对布鲁氏菌病进行检测,具备区分疫苗免疫和野生型布鲁氏菌感染的能力,可满足目前临床上布鲁氏菌病诊断的需要,对我国奶牛布鲁氏菌病的防治、监测和净化具有重要意义,同时也提供了技术支持和物质基础。