【摘 要】
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背景数据显示,2020年全球因肝硬化所导致的死亡人数中,酒精引起的肝硬化占48.9%,同时也占各种疾病死因的0.93%。流行病学调查显示,我国酒精性肝病的平均患病率为4.5%,呈逐年上升趋势。因此,酒精性肝病已经成为当前一个严重影响国民健康的问题。Sirtuins是一类从高度保守的NAD+依赖型的组蛋白/非组蛋白去乙酰基化酶。Sirtuin 6（SIRT6）作为其家族成员之一,参与调控代谢、炎症以
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背景数据显示,2020年全球因肝硬化所导致的死亡人数中,酒精引起的肝硬化占48.9%,同时也占各种疾病死因的0.93%。流行病学调查显示,我国酒精性肝病的平均患病率为4.5%,呈逐年上升趋势。因此,酒精性肝病已经成为当前一个严重影响国民健康的问题。Sirtuins是一类从高度保守的NAD+依赖型的组蛋白/非组蛋白去乙酰基化酶。Sirtuin 6（SIRT6）作为其家族成员之一,参与调控代谢、炎症以及应激抵抗等多种重要的生理功能。研究表明,SIRT6对于肝细胞代谢稳态的维持有着十分重要的作用。但SIRT6在酒精性肝病中的作用及其分子机制仍有待研究。目的阐明SIRT6对酒精性肝病形成的影响,并探究其作用机制,发现并验证介导SIRT6影响酒精性肝病形成的新基因。方法本实验采用8-10周龄的雄性小鼠,利用酒精喂养（8周）加一次过量给予（chronic plus binge ethanol feeding）的方式来建立酒精性肝病的小鼠模型。构建肝细胞特异性敲除和过表达SIRT6小鼠动物模型。酒精喂养后,通过H&E染色,检测肝组织的总体形态及脂肪空泡大小;通过免疫组化分析炎性细胞分布和氧化应激含量;用氯仿/甲醇抽提法,定量分析肝脏的脂肪含量;通过生化分析检测血清中的ALT、AST的指标,评估肝损伤程度;提取肝脏的总RNA和蛋白,检测基因的表达水平;以及利用体外肝原代细胞培养技术,通过腺病毒介导SIRT6过表达及敲减的方法,研究SIRT6对内质网应激的调节作用。同时在全基因组范围内系统分析基因表达的差异,以获得在酒精性肝病中潜在的受SIRT6调控的新的基因靶点。结果1.酒精刺激减少了肝脏中SIRT6的表达;2.在酒精性肝病的小鼠模型中,在肝细胞中特异性敲除SIRT6会加重肝损伤和酒精性脂肪肝的表型,增加氧化应激压力、炎性细胞浸润;3.在酒精性肝病的小鼠模型中,在肝细胞中过表达SIRT6能抵抗酒精所引发的肝损伤及相关病变;4.金属硫蛋白基因的表达受SIRT6的调控,在酒精性肝病的小鼠模型中,肝脏过表达MT1能缓解SIRT6缺失所引起的肝脏脂质堆积、肝脏损伤和氧化应激;SIRT6能够协同转录因子MTF1,促进MT1/2基因的表达;5.肝细胞中的SIRT6能调控酒精刺激下肝脏的内质网应激;6.TUDCA处理能降低酒精刺激产生的肝脏ER stress,并缓解酒精诱发的肝细胞中特异性敲除SIRT6的小鼠肝脏病变;7.SIRT6对酒精刺激下ER stress相关基因的表达有直接的调控作用。结论我们的研究结果阐明了SIRT6的存在能缓解酒精刺激下肝脏所产生的脂肪变性,氧化损伤及炎性细胞浸润等。机理上,SIRT6能通过促进金属硫蛋白的表达,清除酒精代谢所产生的氧化应激压力,从而保护肝脏免受酒精导致的损伤;此外,SIRT6还能通过减少酒精刺激下肝细胞内的ER Stress,减少脂质堆积及肝脏炎症,抵抗酒精导致的肝损伤。本研究揭示了SIRT6在酒精性肝病中的作用,为酒精性肝病的预防和治疗提供了一定的理论基础。
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