琼胶酶的制备、分离纯化及酶学性质研究

来源 :浙江工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mumu_lucky
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文对实验室从浙江沿海水域海水中分离得到的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)WL菌株进行平板分离纯化,筛选出酶活较高的菌株作为出发菌株。对该菌株进行紫外诱变,筛选到1株产琼胶酶活力为26.7U/mL,较出发菌株提高了12.2%的菌株WL-68。对WL-68进行γ-射线诱变,得到了产琼胶酶酶活力为31.5U/mL,较WL-68提高了25.0%的菌株WL-68-46。对WL-68-46进行N+离子注入诱变,筛选得到1株高产琼胶酶的菌株WL-68-46-15,产琼胶酶活力达到47.3U/mL,较WL-68-46提高了53.6%,较出发菌株提高了108%。将菌株WL-68-46-15标记为WL-15。优化了产酶培养基中作为菌体生长碳源的琼胶、作为氮源的NaNO3和主要盐类NaCl的浓度,得出在琼胶、NaNO3和NaCl的浓度分别为2.5g/L,6.0g/L,15.0g/L时,类芽孢杆菌菌株WL-15的产酶活力达到了53.3U/mL,较优化前酶活提高了17.9%。遗传稳定性试验表明菌株WL-15具有较好的产酶稳定性。将菌株WL-15从斜面培养基接入种子培养基中扩培24h后,再转接至发酵培养基中培养24h。发酵培养结束后将发酵液于4℃、8000r/min下离心20min弃去沉淀,得到的上清液即为粗酶液。粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,收集硫酸铵饱和度为20%-80%的沉淀。沉淀溶解在20mmol/L pH7.5的磷酸盐缓冲液中,离心去除不溶的物质,将溶液装入透析袋中于同样的缓冲液中透析2d,浓缩后上样于DEAE-阴离子交换柱。经过预实验确定DEAE-阴离子交换柱层析的平衡液为浓度20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,洗脱液为含有0~1mol/L NaCl的20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,流速为1mL/min,收集洗脱液,3mL/管。合并有酶活的组分,浓缩后上样于凝胶层析柱。凝胶层析的洗脱液为20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,流速为1mL/min,收集洗脱液,2mL/管。合并有酶活的组分,冷冻干燥后得到酶粉。SDS-PAGE结果显示得到的琼胶酶为单一条带,相对分子质量为30kDa。琼胶酶的纯化倍数为11.9倍,酶活回收率为5.1%。对分离纯化得到的琼胶酶进行酶学性质的研究,研究了经分离纯化的琼胶酶最佳作用温度和最适作用pH,得出该琼胶酶水解琼脂的最佳作用温度为40℃,最适作用pH值为6。探讨了金属离子、表面活性剂、金属离子螯合剂等对该琼胶酶水解琼胶的酶活的影响。Na+、K+、Fe2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+、Al3+等金属离子对琼胶酶水解琼脂具有促进作用,Cu2+和Mn2+对其水解琼脂具有较强的抑制作用。表面活性剂SDS、金属离子螯合剂EDTA均对琼胶酶水解琼脂有一定的加强作用。通过研究该琼胶酶对不同浓度的琼胶底物的水解速度,采用双倒数做图法得到该酶水解的米氏常数Km值、最大水解速度Vm值分别为3.41mg/mL和444.3U/(mL·min),说明了该琼胶酶对琼脂具有较大的亲和力和较高的作用效率。底物专一性的研究表明该琼胶酶对琼脂具有很好的底物专一性,同时对卡拉胶有一定的水解作用。
其他文献
伴随中国经济的高速发展以及对环保的重视,传风力发电作为清洁能源越来越引起重视,风电具有清洁、可再生、低碳环保、可持续性等特点。目前我国风电装机已连续多年世界第一,
能够捕获并销毁化学战剂(Chemical warfare agents,CWAs)的自解毒材料,可以有效地进行个人防护和安全处理受污染的材料,制定新策略来提高自解毒材料的CWA降解效率与所采用的降解方法有较大的关联。金属-有机框架化合物(Metal-organic frameworks,MOFs)材料有超高的比表面积和丰富的吸附、催化位点,因此在同时捕获并快速降解化学战剂方面成为了最有前景的材料。
美国首位来华医学传教士伯驾(Peter Parker)曾以驻华公使身份,于1856年12月12日、1857年2月12日及3月10日三次致函美国国务院,建议美国占领中国台湾。但由于该主张既不符合当时美
目的:通过对气血亏虚型慢性偏头痛患者冷加压实验研究,评估气血亏虚型慢性偏头痛患者血管内皮功能。方法:本实验以气血亏虚型慢性偏头痛患者为实验组,对照组为健康体检者。实验组头痛缓解期、头痛发作期及健康对照组全部行冷加压实验。共观察实验组36例、对照组36例。根据所得数据,进行统计学处理。结果:气血亏虚型CM在头痛缓解期(10/36)比对照组(3/36)行冷加压实验出现颈动脉收缩概率更高;实验组头痛急性
目的:本研究旨在分析江苏省如皋市2010-2017年常见传染病的发病情况和流行特征,探讨有效的传染病预防控制措施,为制定传染病防控策略提供科学依据。方法:传染病疫情资料来源
安全是社会和谐、经济增长的保障;安全教育是做好安全工作的思想保障;丰富的教育内容和形式是提高教育效果的保障;加强安全思想是提升综合能力的保障。
近年来,全球定位系统(GPS)在民用导航与监控、交通管理、测绘科学与技术、精细农业、休闲旅游等领域获得广泛应用,同时其它卫星导航体系也飞速发展。针对传统以硬件实现的GPS
首先对全国部分地区大学生物理竞赛中电磁学试题所占的比例进行统计,然后分析电磁学试题中各知识点的分布情况,最后对电磁学试题的方法进行剖析.
空间平面与直线之间有多种位置关系,文中总结了空间平面与直线之间的位置关系及它们相应的解析表达式和度量关系,并结合例题给出空间平面与直线的一些应用。
从复合词的次序入手,论述某些学科名称的核心词之所在,也即该学科的重心之所在。正确理解自己从事的学科是必须的。学科名称是一个学科最基本的概念,是人们在总结学科实践的基础