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本文对实验室从浙江沿海水域海水中分离得到的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)WL菌株进行平板分离纯化,筛选出酶活较高的菌株作为出发菌株。对该菌株进行紫外诱变,筛选到1株产琼胶酶活力为26.7U/mL,较出发菌株提高了12.2%的菌株WL-68。对WL-68进行γ-射线诱变,得到了产琼胶酶酶活力为31.5U/mL,较WL-68提高了25.0%的菌株WL-68-46。对WL-68-46进行N+离子注入诱变,筛选得到1株高产琼胶酶的菌株WL-68-46-15,产琼胶酶活力达到47.3U/mL,较WL-68-46提高了53.6%,较出发菌株提高了108%。将菌株WL-68-46-15标记为WL-15。优化了产酶培养基中作为菌体生长碳源的琼胶、作为氮源的NaNO3和主要盐类NaCl的浓度,得出在琼胶、NaNO3和NaCl的浓度分别为2.5g/L,6.0g/L,15.0g/L时,类芽孢杆菌菌株WL-15的产酶活力达到了53.3U/mL,较优化前酶活提高了17.9%。遗传稳定性试验表明菌株WL-15具有较好的产酶稳定性。将菌株WL-15从斜面培养基接入种子培养基中扩培24h后,再转接至发酵培养基中培养24h。发酵培养结束后将发酵液于4℃、8000r/min下离心20min弃去沉淀,得到的上清液即为粗酶液。粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,收集硫酸铵饱和度为20%-80%的沉淀。沉淀溶解在20mmol/L pH7.5的磷酸盐缓冲液中,离心去除不溶的物质,将溶液装入透析袋中于同样的缓冲液中透析2d,浓缩后上样于DEAE-阴离子交换柱。经过预实验确定DEAE-阴离子交换柱层析的平衡液为浓度20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,洗脱液为含有0~1mol/L NaCl的20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,流速为1mL/min,收集洗脱液,3mL/管。合并有酶活的组分,浓缩后上样于凝胶层析柱。凝胶层析的洗脱液为20mmol/L、pH7.5的磷酸盐缓冲液,流速为1mL/min,收集洗脱液,2mL/管。合并有酶活的组分,冷冻干燥后得到酶粉。SDS-PAGE结果显示得到的琼胶酶为单一条带,相对分子质量为30kDa。琼胶酶的纯化倍数为11.9倍,酶活回收率为5.1%。对分离纯化得到的琼胶酶进行酶学性质的研究,研究了经分离纯化的琼胶酶最佳作用温度和最适作用pH,得出该琼胶酶水解琼脂的最佳作用温度为40℃,最适作用pH值为6。探讨了金属离子、表面活性剂、金属离子螯合剂等对该琼胶酶水解琼胶的酶活的影响。Na+、K+、Fe2+、Mg2+、Ba2+、Sr2+、Al3+等金属离子对琼胶酶水解琼脂具有促进作用,Cu2+和Mn2+对其水解琼脂具有较强的抑制作用。表面活性剂SDS、金属离子螯合剂EDTA均对琼胶酶水解琼脂有一定的加强作用。通过研究该琼胶酶对不同浓度的琼胶底物的水解速度,采用双倒数做图法得到该酶水解的米氏常数Km值、最大水解速度Vm值分别为3.41mg/mL和444.3U/(mL·min),说明了该琼胶酶对琼脂具有较大的亲和力和较高的作用效率。底物专一性的研究表明该琼胶酶对琼脂具有很好的底物专一性,同时对卡拉胶有一定的水解作用。