AKT通路调节肿瘤细胞的增殖、存活,与肿瘤的发生发展密切相关。阻断该通路的高活性,将有可能提高肿瘤治疗的效果。本课题将应用靶向AKT通路的非编码RNA技术联合化疗,研究其对人乳腺癌细胞MCF-7的体外抑制作用。　　 应用靶向P13Kp85a的siRNA敲低在MCF-7细胞中的表达。MTT结果显示P13Kp85α siRNA组细胞生长速度明显小于对照组和空载体转染组;流式细胞术表明细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡比例显著提高。免疫荧光及Western blot结果均显示PI3Kp85α、p-AKT、AKT-2、Ki67和Bcl-2蛋白表达的强度均减弱。　　 Oligofectamine转染靶向AKT1的siRNA至MCF-7细胞,RT-PCR结果表明AKT1 siRNA组可以有效敲低AKT1的表达水平;MTT结果显示AKT1 siRNA组细胞增殖率显著降低:流式细胞术分析细胞在G0/G1期阻滞,凋亡比例明显高于对照组与空载体转染组;免疫荧光和western blot结果均表明AKT、p-AKT、Ki67、Bcl-2几个重要癌蛋白的表达水平均有明显的下调。　　 重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K介导的靶向AKT1,PI3KP85亚基的shRNA可以有效敲低AKT1、PI3Kp85表达水平。下游相关因子PCNA、CyclinD1表达下调,P53表达则上调。MTT法分析显示rAd5-siAKT1-siPI3K转染组胞生长抑制率＞50％,流式细胞术分析结果显示出现G0/G1细胞周期阻滞。2-Dmatrigel基质生长实验表明细胞贴壁生长能力明显减低,3-Dmatrigel基质生长实验显示rAd5-siAKT1-siPI3K转染组细胞形成的细胞团块较小。　　 探讨以PAMAM为载体介导。miR-21抑制剂联合紫杉醇的抑瘤作用。联合治疗组细胞半数抑制浓度(IC50)从600nmo/L降低到80nmo/L;MTT结果表明联合治疗组细胞增殖率显著降低,流式细胞仪表明细胞凋亡比例显著升高,细胞周期的G0/G1期和S期均被阻滞;Transwell法检测联合治疗组细胞体外侵袭能力显著下降。Western blot结果表明EGFR、p-AKT、STAT3、p-STAT3、BcL-2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均有明显的下调,而PTEN和Caspase-3的表达则明显上调。证明PAMAM介导miR-21抑制剂联合紫杉醇对乳腺癌的生长具有明显的抑制作用,可以成为治疗乳腺癌细胞的新策略。