目的：⑴比较变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)患者及健康人群组胺H4R受体在外周血单个核细胞(peripheral blood monocuclear cells，PBMCs)的表达差异，探讨H4R与AR的相关关系。⑵观察组胺对单核细胞系U937细胞分泌Th1/Th2相关细胞因子的影响，从受体和配基作用的量效关系的多个方面探讨组胺H4R在介导组胺对U937细胞中的作用。⑶建立尘螨变应原刺激外周血单核细胞以及PBMCs的作用模式，从H4R与不同配基的作用以及与H1R比较等方面探讨H4R对AR患者单核细胞及PBMCs的作用机制。观察H4R在AR中的组织学特征，进一步阐明H4R在AR中的免疫调节作用。　　 方法：　　 ㈠组胺H4R在变应性鼻炎中的表达及临床意义。　　 对73例确诊AR患者(AR组)以及30例健康人(NAR组)，用Western蛋白印迹法以及实时定量荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent quantificationPCR，qRT-PCR)检测两组对象PBMCs中组胺H4R的蛋白表达及基因含量。用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbnent assay，ELISA)检测AR组患者外周血血清IL-12及IL-4的含量，分析H4R的表达含量与IL-12、IL-4以及与二者比值的关系。　　 ㈡组胺H4R对单核细胞系U937的调控。　　 ⑴将梯度浓度的组胺分别加入生长活跃期的人骨髓单核细胞细胞系U937细胞共培养，检测共培养前及共培养后第6h、12h、24h、48h、72h时培养上清液中Th1/Th2型细胞因子γ-IFN及IL-6的表达含量，用统计学方法分析组胺对这两种细胞因子的影响有无剂量-效应关系及时间-效应关系，绘制相应的曲线。　　 ⑵综合考虑组胺与U937细胞系生成γ-IFN及IL-6的两条剂量-效应曲线选择一合适的组胺浓度用于后续实验。将生长活跃期U937细胞分别加入PBS液、组胺(10-5M)、组胺(10-5M)+H1R阻断剂Triprolidine(10-7M～10-4M四个梯度浓度)、组胺(10-5M)+H4R阻断剂JNJ7777120(10-7M～10-4M四个梯度浓度)、或梯度浓度的H4R激动剂4-Methylhistamine共培养，ELISA法检测不同时间(0h，12h，24h、48h、72h)各培养上清的γ-IFN及IL-6的表达含量，分析Triprolidine以及JNJ7777120对组胺影响U937分泌两种细胞因子的阻断作用的特点。　　 ⑶依据上面实验结果选择合适的单一浓度的上述试剂重复实验，U937细胞分为六组，分别加入PBS液、组胺、组胺+Triprolidine、组胺+JNJ7777120、组胺+Triprolidine+JNJ7777120、4-Methylhistamine共培养，每组4个重复。ELISA法检测各试剂单一浓度，同一时间(培养后第24h)时上清中的γ-IFN及IL-6的表达含量。用qRT-PCR检测U937细胞组胺H1R及H4R的表达含量。分析组胺H4R在介导组胺对U937细胞调控中的作用，以及比较H4R与H1R在介导组胺生物学效应中的相互关系。　　 ㈢组胺H4R对变应性鼻炎免疫调控机制初探。　　 ⑴组胺H4R对AR单核细胞以及PBMCs的调控：无菌分离人外周血单核细胞以及PBMCs，建立尘螨刺激人单核细胞以及PBMCs的实验模型，观察细胞培养上清中T辅助细胞相关因子的变化。分别抽取对尘螨过敏的AR患者及健康人(Control组)的外周血，提取外周血单核细胞或PBMCs(单核细胞n=24，PBMCsn=24，均为AR组及Control组各一半的实验对象)进行培养。将每位实验对象的PBMCs分为六份，分别加入PBS、尘螨变应原(简称螨)、螨+Triprolidine、螨+JNJ7777120，螨+Triprolidine+JNJ7777120，螨+4-Methylhistamine共培养，检测培养上清中γ-IFN、IL-6、IL-4(PBMCs检测，单核细胞不检测)的含量。qRT-PCR法检测H1R、H4R在AR患者及健康人单核细胞以及PBMCs上的表达。分析H4R对AR患者单核细胞、PBMCs的作用，以及比较H4R与H1R在介导组胺生物学效应中的相互关系。　　 ⑵组胺H4R在AR中的病理学和组织学特点：用HE染色、瑞氏染色、H4R免疫荧光染色对AR患者及健康人PBMCs进行染色，了解H4R在PBMCs上表达的特点；用HE染色、H4R免疫荧光化学染色对AR患者及健康人鼻粘膜进行染色，了解H4R的表达的组织学特点。　　 结果：　　 ①AR患者PBMCs中H4R蛋白表达和mRNA表达均明显高于健康对照组。AR患者的mRNA含量与IL-4的表达呈正相关(r=0.71，P＜0.01)，与IL-12的表达呈负相关(r=-0.64，P＜0.01)，与IL-4/IL-12比值亦有显著的相关性(r=0.84，P＜0.01)。　　 ②组胺H1R及H4R在单核细胞系U937细胞上均有表达，以GAPDH为内参，组胺H4型受体的表达量高于H1型受体，其相对表达量分别为0.60％及0.29％。　　 ③组胺对U937细胞的调控：组胺能呈剂量依赖性地抑制U937细胞分泌γ-IFN，同时增加U937细胞分泌IL-6(γ-IFN：F=96.14，P＜0.01，IL-6：F=134.18，P＜0.01)。组胺对U937分泌γ-IFN和IL-6的影响也具有时间依赖性(重复测量的方差分析，γ-IFN：球形检验P=0.69，各时间点差异F=18.96，P＜0.01；IL-6：球形检验P＜0.01，Pillai's Trace F=113.89，P＜0.01)。　　 ④组胺H4R介导组胺对U937细胞调控中的作用：组胺H4R的特异性激动剂4-Methylhistamine能引起U937细胞的上述类似组胺的相似作用。组胺H4R特异性阻断剂JNJ7777120能显著性阻断组胺对U937分泌γ-IFN和IL-6的影响。JNJ7777120对组胺抑制U937分泌γ-IFN的阻断作用有剂量依赖性(F=65.93，P＜0.01)，但无时间依赖性，对组胺刺激U937分泌IL-6的阻断作用有剂量依赖性和时间依赖性(剂量：F=39.97，P＜0.01；时间：球形检验P＜0.01，Pillai's TraceF=370.54，P＜0.01)。H1R阻断剂Triprolidine对组胺对U937分泌上述两种细胞因子的影响也有显著性阻断作用。JNJ7777120与Triprolidine二者对组胺对U937分泌细胞因子的阻断作用呈叠加(γ-IFN)或交互作用(IL-6)。　　 ⑤组胺H4R对人外周血单核细胞及PBMCs的影响：(1)尘螨变应原刺激能引起对尘螨过敏的AR患者外周血单核细胞及PBMCs培养上清液中细胞因子呈Th2型细胞因子IL-6、IL-4(PBMCs中)升高，Th1型细胞因子γ-IFN下降的变化，与对照组相比，三种细胞因子的变化均有显著性差异。尘螨变应原刺激不能引起健康人外周血单核细胞及PBMCs的类似变化。(2)组胺H4R阻断剂JNJ7777120能显著性阻断尘螨刺激后的AR患者外周血单核细胞及PBMCs产生的细胞因子γ-IFN、IL-6、IL-4(PBMCs中)的变化。H1R阻断剂Triprolidine也有类似的影响。两种受体阻断剂的阻断效应呈叠加方式，二者没有交互作用。H4R的激动剂4-Methylhistamine和尘螨的联合使用与单独使用尘螨的效应相似。　　 ⑥免疫荧光染色证实组胺H4R在AR患者及健康人PBMCs及鼻粘膜均有表达，H4R在AR患者鼻粘膜及PBMCs上的表达含量高于健康人。　　 结论：　　 ⑴AR患者的PBMCs上H4R基因水平及蛋白水平的表达均高于健康人。H4R在AR患者PBMCs上的表达与Th1/Th2型细胞因子有相关关系，AR患者H4R的上调可能参与了Th1/Th2平衡的免疫调节。　　 ⑵H4R参与介导了组胺对单核细胞系U937的免疫调控作用，可改变其T辅助细胞相关因子的分泌，调控U937细胞的分化。　　 ⑶组胺H4R在尘螨变应原通过组胺途径对AR患者人单核细胞及PBMCs的的过敏反应中起重要的调控作用，它介导了单核细胞及PBMCs产生的T辅助细胞相关细胞因子的分泌的改变，参与了AR的发生及发展。　　 ⑷在介导组胺调控U937细胞系以及尘螨变应原引起的过敏反应中，组胺H4R较H1R的作用更为显著，两种受体对组胺的共同效应呈叠加方式或交互增强方式。　　 ⑸H4R在AR中具有靶器官的组织学特异性。　　 ⑹H4R参与介导了AR发病的免疫调节过程，是AR治疗的新靶点，组胺H4R阻断剂的研发可能成为新型的抗过敏治疗药物。