碱性成纤维生长因子与血管生成素相互作用机制的初步探究

来源 :东北师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhubob2009
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肿瘤血管生成是肿瘤中在原有血管的基础上形成新血管的过程,对肿瘤的生长、转移和侵润具有重要作用。在正常的生殖和发育过程中,血管生成因子和抑制因子之间处于平衡状态;但是一些病理特别是癌症条件下,血管生成会变得不受控制。肿瘤细胞的生长和转移依赖于血管生成,血管生成过程中有许多生长因子参与,人们已经鉴定了多种直接或间接影响内皮细胞生长的因子,其中包括碱性成纤维生长因子(bFGF)和Angiogenin(血管生成素)等。人们对肿瘤发生机制的研究较多,主要集中在对某一种或几种血管生成因子或血管生成抑制因子的研究。但鲜为人知的是各种血管生成因子之间是如何协同作用、如何调控肿瘤血管发生、如何定向抑制某一种因子的。经过10年的研究,本实验室发现血管生成素和bFGF之间存在负反馈调节,血管生成素可以和bFGF的启动子区发生作用,作用区间确定在-970bp到-834bp之间,而且血管生成素对bFGF表达的调节作用和bFGF启动子该区间的CT重复序列有关。在本实验室前期研究结果的基础上,我们继续对血管生成素和bFGF两种生成因子之间的作用机制进行探究。首先,探究了血管生成素是否直接结合于bFGF启动子来调控bFGF的表达;其次,构建含有血管生成素基因的原核表达载体,含有bFGF基因的真核表达载体;原核表达获得血管生成素重组蛋白,并通过GST pull down技术验证蛋白水平上血管生成素和bFGF两种生成因子是否在体外直接作用。结果显示:我们成功构建了原核表达载体pGEX-2T-Angiogenin,并且在大肠杆菌中成功表达了血管生成素重组蛋白,通过和Glutathione Sepharose4B珠子作用纯化了血管生成素重组蛋白。同时成功构建了真核表达载体pKH3-bFGF。最后证明血管生成素和bFGF两种血管生成因子在体外无直接的相互作用。
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