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乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类长期应用于食品发酵、生物医药工业且被公认为安全的食品级微生物。近年来,探究一些有实际应用价值的基因在乳酸菌中的克隆和表达,构建带有食品级筛选标记的乳酸菌表达系统己成为乳酸菌分子生物学的研究热点。本论文构建了一种以nisI基因为筛选标记,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因的乳酸菌表达载体并对其进行初步应用,为研究乳酸菌的体内定植规律和食品级乳酸菌产品的开发奠定基础。本实验通过分子生物学手段,以质粒pLEB590为模板扩增nisI基因,在质粒pMG36e中成功插入该基因,构建了乳酸菌表达载体pMG36e-nisI,将其电转化至乳酸乳球菌WH-C1(Lactococcus lactis WH-C1)中,转化子具有Nisin抗性；对乳酸菌表达载体pMG36e-nisI进行应用,导入绿色荧光蛋白GFP基因,成功构建了乳酸菌重组质粒pMG36e-nisl-gfp,并转化到乳酸乳球菌WH-C1、植物乳杆菌MA2(Lactobacillus plantarum MA2)、植物乳杆菌KF5(Lactobacillus plantarum KF5)及嗜热链球菌34(Streptococcus thermophilus34)中,该重组质粒在转化成功的宿主菌内能够表达可观测的绿色荧光蛋白；通过对转化子菌株的菌体形态观察、传代培养、质粒验证等研究,考察了重组.质粒pMG36e-nisl-gfp在乳酸菌中的稳定性,结果表明该重组质粒在乳酸菌中具有良好的稳定性。通过动物实验,小鼠灌胃重组乳酸乳球菌WH-C1/pMG36e-nisI-gfp6h后,可在胃肠道检测到重组菌,并且在42h达到定植高峰,72h后菌数仍达到104CFU/g,说明小鼠在灌胃重组乳酸乳球菌WH-C1/pMG36e-nisI-gfp后,重组菌在胃肠道的不同部位,能够以一定的比例存活并附着在肠黏膜表面。