罗非鱼鱼鳞胶原及其低聚肽的制备及纯化

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罗非鱼作为联合国粮农组织推荐的经济鱼类,在我国的产量巨大。每年近半数的罗非鱼需经过加工出口。在处理过程中,会产生大量的鱼鳞、鱼皮、内脏等副产物。其中鱼鳞的主要成分为胶原蛋白,如果能合理利用,既可以解决环保问题,又能提高罗非鱼的综合利用。本文以罗非鱼鱼鳞为原料,从中提取胶原蛋白以及胶原蛋白低聚肽。主要研究成果如下:为了后续实验中能准确测得胶原蛋白含量,本研究首先对胶原蛋白水解过程和测定细节进行优化、评价。以硫酸为水解液,127℃真空条件下反应5h,比传统方法省时,减少酸的用量。在单因素试验的基础上,通过SAS 9.2软件,采用响应面法建立了罗非鱼鱼鳞胶原蛋白提取工艺的二次多项式数学模型。分析了水提温度、液固比、时间对响应值的影响。结果表明:对响应值影响程度由大到小依次为温度、时间、液固比;通过解相应回归方程组求得水提罗非鱼鱼鳞胶原蛋白的最佳工艺为:温度选择120℃,液固比选择46,提取5 h 39 min,在此条件下的胶原蛋白的得率:44.58%,44.89%以及44.16%。所提取的胶原蛋白在225 nm处有最大吸收值,含量最多的为甘氨酸,色氨酸、酪氨酸以及苯丙氨酸几乎不含。以水解度为指标,以单因素试验分别考察了多种蛋白酶对罗非鱼鱼鳞胶原蛋白的酶解效果,发现复合风味蛋白酶酶解胶原蛋白的效率最高。使用Plackett-Burman试验从温度、底物浓度、溶液pH、加酶量以及酶解时间5个独立参数中筛选影响酶解效率的主要因素:分别为酶解温度、溶液pH以及加酶量E/S。以这三个因素为自变量,以胶原蛋白水解度为响应值,采用响应面试验设计优化复合风味蛋白酶制备罗非鱼鱼鳞胶原蛋白低聚肽的制备条件,当温度选择49℃,pH值7.2,加酶量16700U/g,胶原蛋白的水解度最大,为10.85%,10.98%以及10.76%。采用膜分离技术对罗非鱼鱼鳞胶原蛋白肽进行分离分级,得到三个不同组分:组分Ⅰ(大于5000 Da)、组分Ⅱ(介于500~5000 Da)以及组分Ⅲ(小于500 Da)。通过三种体外抗氧化指标评价各其各自的抗氧化活能力。结果表明,抗氧化效果与组分的浓度相关,不同组分活性不同,其中分子量小于500 Da的组分Ⅲ活性最好。将组分Ⅲ经过Sephadex G15纯化,得到a,b,c,d四个组分。再次进行抗氧化试验,其中b,c两个组分抗氧化能力较高,比纯化前的组分Ⅲ有一定提升。
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